HARTENBACH, Fátima Aparecida Rocha Resende Hartenbach. Análise microbiológica do biofilme subgengival e do proteoma salivar na doença periodontal. Rio de Janeiro, 2019. Tese (Doutorado em Odontologia – Periodontia). Faculdade de Odontologia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2019.
Objetivo: A periodontite é uma doença inflamatória crônica que resulta da disbiose do biofilme dentário e uma disregulada resposta do hospedeiro em indivíduos susceptíveis. Ela é caracterizada pela perda de inserção periodontal, reabsorção óssea alveolar e eventual perda dentária. Devido ao seu impacto na saúde oral, a identificação de vários biomarcadores ou perfis para um diagnóstico precoce e melhor prognóstico das doenças periodontais tem sido o foco de diversas pesquisas nas últimas décadas. Portanto, esse estudo comparativo teve como objetivo determinar perfis biológicos relacionados à periodontite crônica (PC) e à saude periodontal (SP) baseados na composição da microbiota subgengival e no proteoma salivar. Métodos: Um total de 30 indivíduos com PC e 10 com SP foram selecionados. A saliva estimulada foi coletada e distribuída em 5 pools de SP e 15 pools de PC, precipitados com TCA, digerido enzimaticamente com tripsina e analisado por espectrometria de massas usando o LTQ Orbitrap Velos acoplado a um nanoHPLC. As amostras do biofilme subgengival foram coletadas individulamente dos 40 pacientes e a análise da composição da microbiota foi realizada pela técnica do checkerboard DNA-DNA hybridization. Diferenças na frequência e nos níveis das espécies microbianas e do proteoma de saliva entre os grupos foram analisadas pelos testes qui-quadrado e Mann-Whitney, enquanto que correlações entre parâmetros clínicos, salivares e microbiológicos foram analisados pelo coeficiente de correlação de Pearson. Análise de cluster foi realizada para agrupar indivíduos e determinar perfis relacionados à doença com base nos níveis médios de microorganismos subgengivais e proteínas salivares. Resultados: Uma ampla gama de proteínas salivares de várias funções estava significativamente reduzida em indivíduos com PC, enquanto a fosfoproteína rica em prolina salivar ácida, a proteína reguladora de andrógeno da glândula submaxilar, histatina, proteína de ligação a ácidos graxos, tioredoxina e cistatina foram predominantes na PC e correlacionaram com sinais de perda de inserção periodontal e inflamação. A maioria das espécies subgengivais foi detectada em altos níveis na PC, mas poucas diferiram significativamente entre os grupos. Foi observada uma grande heterogeneidade no perfil microbiológico dos pacientes com SP e PC. Níveis elevados de vários microorganismos x apresentaram forte correlação com baixos níveis de diversas proteinas salivares. O agrupamento de pacientes utilizando a composição da microbiota e o proteoma salivar resultou em um grupo homogêneo de indivíduos com PC caracterizado por aumento da idade, baixos níveis de Propionibacterium acnes, Enterococcus faecalis, Parvimonas micra, Lactobacillus spp., Peptostreptococcus anaerobius e altos níveis de cistatina, hemopoxina, imunoglobulinas, proteínas induzidas por prolactina, proteínas ricas em prolina e proteína reguladora de andrógeno da glândula submaxilar. Entretanto, outros indivíduos com PC e SP não foram adequadamente discriminados. Conclusão: Baixos níveis de proteínas salivares específicas e altos níveis de microorganismos subgengivais foram associados à PC. Uma alta variabilidade inter-individual na microbiota em combinação à diversidade do proteoma salivar não foi capaz de discriminar todos os indivíduos em saúde e doença, mas um pequeno grupo de pacientes com PC.