O desenvolvimento, a diferenciação e a homeostase de células aderentes são
controlados por interações célula-célula, célula-matriz extracelular (MEC) e célulafatores solúveis. A perda destes contatos induz a um tipo específico de apoptose, o
anoikis. Células tumorais adquirem a capacidade de resistir ao anoikis, sobreviver
após a perda de ancoragem e viajar através do sistema vascular, podendo colonizar
órgãos distantes. Este processo é denominado de metástase. A ativação da via de
sinalização PI3K/Akt é o mecanismo mais comum para atingir a resistência ao
anoikis em células cancerígenas. Esta via apresenta, assim, uma oportunidade e um
desafio para a terapia do câncer.
Estudos anteriores do nosso grupo relataram que a aquisição da resistência ao
anoikis por células endoteliais de aorta de coelho desencadeou alterações
morfológicas, alta taxa de proliferação, baixa adesão à fibronectina, laminina e
colágeno IV, alto potencial invasivo, baixa taxa de apoptose e desregulação do ciclo
celular. Além disso, as linhagens celulares resistentes ao anoikis exibem regulação
positiva das vias Ras/ERK e PI3K/Akt. Isso é acompanhado por um extenso
remodelamento da MEC. O papel da PI3K no câncer foi destacado pela observação
de que o gene que codifica a subunidade catalítica p110α está frequentemente
mutado nos cânceres humanos mais comuns. Neste estudo, buscamos elucidar o
papel da proteína PI3K subunidade catalítica p110α na aquisição do fenótipo
anoikis-resistente e na regulação de características celulares diretamente
relacionadas à tumorigênese tais como, taxa de apoptose, proliferação celular,
capacidade adesiva, capacidade invasiva e sinalização celular a jusante de PI3K
p110α. Para tanto, foi efetuado o knockdown de PIK3CA, gene que codifica tal
proteína.
Células endoteliais resistentes ao anoikis (Adh1-EC) submetidas ao knockdown de
PIK3CA originaram as linhagens celulares miR-PIK3CA-Adh1-EC 1 e miR-PIK3CAAdh1-EC 2. Essas linhagens apresentaram uma reversão nas características
associadas à malignidade: diminuição na capacidade de resistência ao anoikis e da
taxa de proliferação celular, aumento na taxa de apoptose e na atividade das
caspases 3, 7, 8, aumento da taxa de adesão à fibronectina, no entanto as taxas de
adesão ao colágeno IV e à laminina não foram alteradas. Isso foi acompanhado por
xix
uma diminuição na capacidade invasiva, redução na expressão gênica e proteica de
Akt (fosforilada na treonina 308 e na serina 473), mTOR (fosforilada na serina 2448),
PTEN e H-Ras. Foi observada também uma redução na expressão gênica de ERK,
porém essa redução não se refletiu nos níveis proteicos de ERK1/2 fosforiladas nos
resíduos treonina 202 e tirosina 204, treonina 185 e tirosina 187.
Em resumo, o knockdown de apenas uma subunidade da família das PI3Ks, a
p110α, mostrou bons resultados na reversão do fenótipo anoikis-resistente de
células endoteliais. Tais resultados fornecem uma base molecular para o
desenvolvimento de novas terapias para o tratamento de cânceres metastáticos.
Essa estratégia pode ajudar a superar a resistência à apoptose em cânceres com
ativação aberrante da via PI3K/Akt.