Dados do Trabalhos de Conclusão

UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS
CIÊNCIAS VETERINÁRIAS (32004010015P0)
IDENTIFICAÇÃO DE DOMÍNIOS CONSERVADOS ASSOCIADOS A RESISTÊNCIA A ACARICIDAS EM Amblyomma sculptum (Acari: Ixodidae)
MARINA HELENA FIGUEREDO ROSA
TESE
30/08/2019

Este é o primeiro relato da identificação de domínios conservados associados a resistência a acaricidas em Amblyomma sculptum. Na criação de equinos, uma das principais dificuldades é o controle dos carrapatos do complexo Amblyomma cajennense. Vários fatores, como época de aplicação do produto, a base química e a frequência de aplicação, influenciam a eficiência do controle. Assim, considera-se um grande desafio lidar com o desenvolvimento da resistência parasitária. Pouco se sabe sobre resistência no gênero Amblyomma e há poucos estudos. O objetivo do trabalho foi identificar regiões gênicas relacionadas a resistência à acaricidas a base de piretróides e organofosforados em amostras biológicas de Amblyomma sculptum. O trabalho foi desenvolvido em duas etapas. A primeira compreendeu uma pesquisa observacional, com aplicação de um formulário semi-estruturado onde foram levantadas informações para caracterização das propriedades e criadores, assim como o manejo dos acaricidas. A segunda etapa envolveu a parte experimental onde foram realizadas técnicas de biologia molecular para identificação de possíveis regiões gênicas relacionadas a resistência química em A. sculptum. Os carrapatos foram coletados na região Sul de Minas Gerais/Brasil em cavalos naturalmente infestados. Os exemplares foram congelados em ultra freezer -80º C até o processamento. Um total de 24 carrapatos foram macerados com ajuda do Cryocooler® para extração do RNA total e posterior síntese de cDNA, seguida pela PCR. Foram desenhados quatro pares de primers para amplificar as regiões relacionadas com a resistência sendo dois pares de primers para cada base química. As sequências do A. sculptum foram selecionadas de acordo com a similaridade com sequências de outros artrópodes, que já foram relacionadas ao processo de resistência às bases químicas piretróide e organofosforado. Para cada primer foi realizada uma PCR, contabilizando 48 amostras para cada base química. Para o sequenciamento, foram enviadas 2 alíquotas de 20 produtos da PCR, selecionadas de acordo com a intensidade da banda apresentada na eletroforese, totalizando 40 alíquotas, e, após análise dos dados, foi feita uma busca pelo domínio conservado da superfamília de transportadores ABC, relacionada com resistência a múltiplas drogas, no banco de dados “Conserved Domain Database” do NCBI. Observou-se uma grande semelhança no perfil dos criadores, assim como na caracterização da propriedade, manejo e controle do A. sculptum. Todos os criadores realizam o controle com aplicação de algum produto carrapaticida, estando os piretróides como o grupo químico mais utilizado. A maioria dos entrevistados parece confundir o ciclo e controle do A. sculptum com o R. microplus, o que é um problema claro para o controle. Em relação as análises moleculares, o resultado obtido foi 29 amostras positivas para a região relacionada a resistência a organofosforados e 32 amostras positivas para piretróides. A presença da superfamília dos transportadores ABC sugere que A. sculptum possa apresentar regiões gênicas específicas relacionadas à resistência aos acaricidas a base de piretróides e organofosforados. Esta tese está organizada em duas partes sendo a primeira referente ao referencial teórico e a segunda parte contendo o artigo científico relatando a metodologia e os resultados encontrados.

piretróide;organofosforado;equino;PCR;transportadores ABC
This is the first study that identifies conserved domains related to the resistance to acaricides in Amblyomna sculptum. On the raising of equines, the control of A. sculptum is one of the biggest challenges to the living stock raisers. There is no study in the literature that tries to explain the molecular mechanisms and their components involved on the development of chemical resistance in A. sculptum. Therefore, the objective of this work was to identify conserved domains related to the resistance to the two most commonly used chemical bases in the control of A. sculptum, the pyrethroids and organophosphates. This work was developed in two stages. The first one comprehended an observational research, with the application of a semi-structured form for the characterization of properties and living stock raisers, and for the acaricides-handling as well. On the second stage, the experimental one, molecular biology techniques were done in order to identify the conserved domains related to the chemical resistance in A. sculptum. 24 specimens of A. sculptum were collected, from naturally infested living stock in properties of southern Minas Gerais. The form was applied on those properties. For the molecular analysis, the 24 A. sculptum specimens had their total RNA extracted, followed by the cDNA synthesis. For the PCR, four pairs of primers were synthesized. On the Primer Blast software it was obtained four pairs of primers; two pairs related to the resistance to organophosphate and two pairs related to the resistance to pyrethroids. The PCR, for each pair of primer, was done using the cDNA of the 24 specimens, totalizing 48 samples for each chemical base. The PCR results were subjected to electrophoresis. For the sequencing, it was sent 20 parts. It was noticed a great similarity on the profile of the living stock raisers, as well as for the characterization of property, A. sculptum handling and control. All rliving stock raisers did the control with the application of some anti-tick product, with the pyrethroids as the most used chemical group. Most of the interviewees seems to confound the cycle and control of A. sculptum with the Rhipicephalus microplus and with Dermacentor nitens, which is problematic. When it comes to the molecular analysis, the obtained result was 29 positive samples to the region associated to the resistance to organophosphate and 32 positive samples to pyrethroids. After data analysis, it was done a search for conserved domains in the Conserved Domain Database (CDD) at NCBI. Related to the sequences of A. sculptum, it was identified two domains, both members of the superfamily of ABC transporters. The presence of this superfamily suggests that the studied species might present specific genic regions related to the resistance to acaricides based on pyrethroids and organophosphates. This thesis is organized in two parts, with the first one concerning the theoretic referential and the second part contenting the scientific article reporting the methodology and the found results.
pyrethroid;organophosphorus;equidae;PCR;ABC transporters
01
69
PORTUGUES
UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS
O trabalho não possui divulgação autorizada

Contexto

CIÊNCIAS VETERINÁRIAS
SANIDADE ANIMAL E SAÚDE COLETIVA
AVALIAÇÃO DE DETERMINANTES EPIDEMIOLÓGICOS E MOLECULARES DA RESISTÊNCIA QUÍMICA EM ENDO E ECTOPARASITOS DE EQUINOS DO SUL DE MINAS GERAIS

Banca Examinadora

CHRISTIANE MARIA BARCELLOS MAGALHAES DA ROCHA
DOCENTE - PERMANENTE
Sim
Nome Categoria
CHRISTIANE MARIA BARCELLOS MAGALHAES DA ROCHA Docente - PERMANENTE
ELIZANGELA GUEDES Participante Externo
RAFAEL NEODINI REMEDIO Participante Externo
ANA PAULA PECONICK Docente - PERMANENTE

Financiadores

Financiador - Programa Fomento Número de Meses
FUND COORD DE APERFEICOAMENTO DE PESSOAL DE NIVEL SUP - Programa de Demanda Social 48

Vínculo

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Não