Dados do Trabalhos de Conclusão

UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ
CIÊNCIAS VETERINÁRIAS (22003010001P1)
CARACTERIZAÇÃO E CRIOPRESERVAÇÃO DE SÊMEN DE ONÇA-PINTADA (Panthera onca)
HERLON VICTOR RODRIGUES SILVA
TESE
09/12/2019

Um dos principais pontos da biotecnologia reprodutiva é a criopreservação de sêmen, que possibilita a criação de um banco genético de fácil acesso, bem como permite maximizar a utilização dos gametas masculinos. Portanto, objetivou-se primeiramente descrever as características morfológicas e ultraestruturais do sêmen fresco de onça-pintada e, posteriormente, comparar a qualidade do sêmen pós-descongelação, utilizando-se os diluidores à base de TRIS ou água de coco em pó (ACP-117c). Para tanto, foram utilizados cinco machos de onça-pintada que foram submetidos a duas coletas seminais por eletroejaculação. O sêmen foi avaliado quanto à motilidade total, vigor, funcionalidade da membrana espermática, atividade mitocondrial por meio do 3,3’-diaminobenzidina (DAB) e morfologia dos espermatozoides, além das avaliações ultraestruturais por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e transmissão (MET), como também a análise morfométrica por meio do software Image J. Em seguida, foi realizado o processamento das amostras para criopreservação. Após o término das coletas, as amostras foram descongeladas e, realizadas as mesmas análises feitas nas amostras frescas, exceto a morfometria, além da avaliação computadorizada do sêmen (CASA), como também análise da integridade das membranas celulares por meio de análise de fluorescência e o teste de interação com membrana perivitelínea de ovo de galinha. Os resultados estão expressos na forma de média ± erro médio padrão. Os principais resultados do sêmen fresco foram: motilidade; vigor. As principais alterações morfológicas encontradas foram: na cabeça dos espermatozoides (9,0 ± 1,7%) e defeitos de cauda (12,5 ± 3,3%). A largura e o comprimento da cabeça foram 3,60 ± 0,03 μm e 4,9 ± 0,02 μm, respectivamente, peça intermediária 9,7 ± 0,3 μm, cauda 54,5 ± 4,4 μm, e o comprimento total do espermatozoide foi de 59,5 ± 0,1 μm. Regiões electronlucentes foram encontradas na região do núcleo e aproximadamente 54 espirais mitocondriais na peça intermediária foram identificadas usando microscopia eletrônica. As maiores porcentagens de células foram classificadas como DAB I (46,6 ± 4,9%) e DAB II (38,0 ± 4,4%). No tocante à criopreservação, as amostras preservadas no TRIS apresentaram melhor resultado do que as preservadas no ACP-117c: maior motilidade pós-descongelação (46,0 ± 7,7% vs 20,9 ± 5,4% de espermatozoides móveis; p=), melhor funcionalidade da membrana (60,5 ± 4,2% vs 47,1 ± 2,5% de membrana funcional; p=) e maior atividade mitocondrial (21,5 ± 3,7% vs 11,8 ± 1,7%; p=). Em relação às avaliações ultraestruturais, a MEV mostrou que ambos os diluidores foram capazes de preservar o plasmalema espermático, mas a MET revelou a ocorrência de pontos electronlucentes, especialmente em amostras preservadas em ACP-117c. Além disso, um maior número de espermatozoides ligados à membrana perivitelina foi observado com as amostras diluídas em TRIS em comparação com o ACP-117c (29,5 ± 3,3% vs 18,6 ± 1,5%; p=). Em conclusão, o diluidor TRIS apresentou melhores resultados do que o diluidor ACP-117c, para a criopreservação de sêmen de onça-pintada.

Avaliação seminal;Congelação;Felidae;Morfologia espermática;Morfometria espermática
One of the main points of reproductive biotechnology is semen cryopreservation, which allows the creation of an easily accessible genetic bank, as well as maximizing the use of male gametes. Therefore, the objective was first to describe the morphological and ultrastructural characteristics of jaguar fresh semen, and then to compare the quality of the post-thawed semen using TRIS or powdered coconut water (ACP-117c) extender. For this, five male jaguars were submitted to two seminal collections by electroejaculation. Semen was evaluated for total motility, vigor, sperm membrane functionality, mitochondrial activity by 3,3'-diaminobenzidine (DAB) and sperm morphology, plus ultrastructural evaluation by scanning electron microscopy (SEM) and transmission (TEM), as well as morphometric analysis using a software (Image J). Then, the samples were cryopreserved. After the end of all collections, the samples were thawed and first performed the same analyzes made on fresh samples, except for morphometry, as well as computerized semen evaluation (CASA), as well as analysis of cell membrane integrity by fluorescence, and the interaction test with perivitelline chicken egg membrane. The main results of fresh semen were morphological abnormalities in sperm head (9 ± 1.7%) and tail defects (12.5 ± 3.3%). Head width and length were 3.6 ± 0.03 μm and 4.9 ± 0.02 μm, respectively, middle piece 9.7 ± 0.3 μm, tail 54.5 ± 4.4 μm, and the total sperm length was 59.5 ± 0.1 μm. Electronlucent regions were found in the nucleus region and approximately 54 mitochondrial spirals in the middle piece were identified using TEM. The highest cell percentages were classified as DAB I (46.6 ± 4.9%) and DAB II (38 ± 4.4%). Regarding cryopreservation, samples preserved in TRIS showed better post-thaw motility (46.0 ± 7.7%) and membrane functionality (60.5 ± 4.2%) and greater mitochondrial activity (21.5 ± 3.7, respectively) than those preserved in ACP-117c (20.9 ± 5.4% mobile sperm; 47.1 ± 2.5% functional membrane; 11.8 ± 1.7% mitochondrial activity). Regarding ultrastructural evaluations, SEM showed that both extenders were able to preserve sperm membrane, but MET revealed electronlucent points, especially in samples preserved in ACP-117c. In addition, a higher number of perivitelline membrane-bound sperm (29.5 ± 3.3%) was observed with samples diluted in TRIS compared with ACP-117c (18.6 ± 1.5%). In conclusion, we suggest the TRIS extender for jaguar semen cryopreservation.
Semen evaluation;Freezing;Felidae;Sperm morphology;Sperm morphometry
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PORTUGUES
UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ
O trabalho possui divulgação autorizada

Contexto

REPRODUÇÃO E SANIDADE ANIMAL
REPRODUÇÃO E SANIDADE DE CARNÍVOROS, ONÍVOROS, HERBÍVOROS E AVES
BIOTECNOLOGIA DA REPRODUÇÃO DE CARNÍVOROS

Banca Examinadora

LUCIA DANIEL MACHADO DA SILVA
DOCENTE - PERMANENTE
Sim
Nome Categoria
CARMINDA SANDRA BRITO SALMITO VANDERLEY Docente - PERMANENTE
NEI MOREIRA Participante Externo
REGINA CELIA RODRIGUES DA PAZ Participante Externo
MOACIR FRANCO DE OLIVEIRA Participante Externo
LUCIA DANIEL MACHADO DA SILVA Docente - PERMANENTE

Financiadores

Financiador - Programa Fomento Número de Meses
FUND COORD DE APERFEICOAMENTO DE PESSOAL DE NIVEL SUP - Apoio à Pós-Graduação 48

Vínculo

CLT
Instituição de Ensino e Pesquisa
Ensino e Pesquisa
Sim