A manipulação de oócitos inclusos em folículos ovarianos pré-antrais permite aumentar o potencial reprodutivo e garantir a conservação da biodiversidade. Neste sentido, objetivou-se estabelecer protocolos eficientes para o isolamento, cultivo e criopreservação de folículos pré-antrais de catetos. Em um primeiro experimento, ovários de seis fêmeas adultas foram destinados a diferentes métodos de isolamento folicular: enzimático utilizando a colagenase tipo IV, mecânico, utilizando lâmina de bisturi, e associação de ambos. Dentre estes, a maior quantidade (P < 0,05) de folículos foi obtido pelo método enzimático (961,7 ± 132,9), o qual também resultou na maior percentagem de folículos viáveis (98,7 ± 0,6%). Em adição, a integridade dos folículos obtidos pelo método enzimático foi confirmada pela microscopia eletrônica de varredura e por fluorescência (86%) após cultivo de 24 h. No segundo experimento, identificou-se a expressão dos receptores ALK-5 (tipo I) e BMPRII (tipo II) em fragmentos ovarianos de catetos por meio de PCR. Em seguida, procedeu-se o cultivo in vitro de tecido ovariano de seis animais por 1 ou 7 dias com Fator de Crescimento e Diferenciação 9 GDF-9 (0, 50, 100 ou 200 ng/mL). Verificou-se que os folículos cultivados por 7 dias com 200 ng/mL de GDF-9 mantiveram o diâmetro folicular e oocitário similar àqueles observados no dia 1. Em comparação com o controle fresco, a porcentagem de folículos em crescimento foi significativamente em todos os tratamentos, especialmente na concentração 200 ng/mL de GDF-9 por 7 dias. Ainda, a presença de GDF-9 a 200 ng/mL melhorou a proliferação celular após o cultivo. No experimento 3, o tecido ovariano foi vitrificado tanto em uperfície sólida como no sistema cryosystem com 3M etilenoglicol (EG), 3M dimetilsulfóxido (DMSO) ou 1,5 M EG associado a 1,5 M DMSO. Após vitrificação, constatou-se que todos os tratamentos mantiveram, de modo similar, a proporção de folículos viáveis e a ocorrência de proliferação celular. No entanto, todos os tratamentos mantiveram a proporção de PFs normais como o grupo controle (75,6 ± 8,6%), exceto (P <0,05) os vitrificados por SSV com EG (52,8 ± 5,9%) ou a combinação de CPAs (54,5 ± 10,4%). Finalmente, a partir da análise da expressão de caspase 3-ativada, apenas as amostras processadas por SSV com EG (43,4%) ou CPAs (33,4%), bem como aquelas vitrificadas em OTC com EG (46,7%), forneceram valores semelhantes aos encontrados para grupo controle fresco (36,7%). Diante destes resultados, sugere-se que o método enzimático é um procedimento eficiente para o isolamento de folículos pré-antrais de catetos; existe receptores BMPR2 e ALK-5 para o GDF-9 no cortex ovariano de cateto e que o GDF-9 na concentração de 200 ng / mL é importante para o desenvolvimento in vitro de folículos ovarianos dessa espécie. Ainda, a vitrificação usando o método OTC com etilenoglicol (3M) como crioprotetores é eficiente para preservação do tecido ovariano de catetos.