Dados do Trabalhos de Conclusão

FUNDACAO OSWALDO CRUZ (FIOCRUZ)
CIÊNCIA EM ANIMAIS DE LABORATÓRIO (31010016148P0)
Sexagem espermática em camundongos (Mus musculus)
PATRICIA REID BEGOSSI CLINIO
DISSERTAÇÃO
14/05/2019

A sexagem de espermatozoides por meio da citometria de fluxo é o método mais utilizado para a separação de células carreadoras dos cromossomos X e Y, baseado na diferença do conteúdo de DNA. Contudo, esta técnica ainda não foi testada em camundongos (Mus musculus). Neste trabalho, objetivou-se estabelecer populações de espermatozoides de camundongo sexo-específicas utilizando esta técnica. Camundongos híbridos B6D2F1 (n=85) foram eutanasiados para coleta de espermatozoides. Estes foram selecionados por meio de swim up, fixados em formol salina, lavados em tampão e marcados com Hoescht 33342®, formando pools de espermatozoides (n=17/ 5 animais por pool). A citometria de fluxo foi realizada em FACS Aria® IIu (BD), configurado para separação usando o nozzle de 85µm, pressão de 45psi e as células foram adquiridas a 500 eventos/segundo, com configuração de pureza e eficiência de 100%. Para validação da técnica realizou-se Real Time PCR com SYBR® Green, utilizando como marcadores os genes SRY para Y e ZFX para X. Os resultados obtidos foram analisados por estatística descritiva. As médias das proporções de X e Y nas amostras após sorting foram 44,08% e 55,92% respectivamente. A variação da intensidade de fluorescência média foi de 101997,55k±14805,18 e 93950,38k±20943,22, respectivamente para X e Y. O valor médio da diferença de emissão de fluorescência entre espermatozoides X e Y foi de 4781k, o que equivale a 2,26% da quantidade de DNA, com variação de 0 a 4,933%. A perda de células durante o processo foi de 99,04%. Concluiu-se que a técnica de sorting em citômetro de fluxo mostrou-se eficiente para separação de espermatozoides de camundongo em duas populações, X e Y, baseada na diferença na quantidade de DNA. CEUA FIOCRUZ: LM-11/18

espermatozoide;citometria de fluxo
Sperm sexing using flow cytometry is the most used method to separate X and Y spermatozoa, based on DNA content difference. However, this technique was not tested in mice (Mus musculus) yet. This work aimed to establish sex-specific mouse spermatozoa populations using this technique. Hybrid mice B6D2F1 (n = 85) were euthanized for collection of spermatozoa. These were selected by means of swim up, fixed in formol saline, washed in buffer and labeled with Hoescht 33342 ®, and spermatozoa pools were established (n = 17/5 animals per pool). Flow cytometry was performed on FACS Aria IIu® (BD), set up for sorting using the 85 μm nozzle, 45psi pressure and the cells were acquired at 500 events / second, with a purity and efficiency setting of 100%. Real Time PCR with SYBR® Green was performed in order to validate that technique, using the SRY genes for Y and ZFX for X, as markers. The results were analyzed by descriptive statistics. The averages of the proportions of X and Y in the samples after sorting were 44.08% and 55.92% respectively. The mean fluorescence intensity variation was 101997.55k ± 14805.18 and 93950.38k ± 20943.22, respectively for X and Y. The mean fluorescence emission difference between X and Y spermatozoa was 4781k, which was equivalent to 2.26% of the amount of DNA, varying from 0 to 4.933%. The loss of cells during the process was 99.04%. It was concluded that flow cytometry sorting technique proved to be efficient for the separation of mouse spermatozoa into two populations, X and Y, based on DNA amount difference. CEUA FIOCRUZ: LM-11/18
spermatozoa;flow cytometry;sorting
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PORTUGUES
FUNDACAO OSWALDO CRUZ (FIOCRUZ)
O trabalho possui divulgação autorizada

Contexto

Ciência em Animais de Laboratório
BIOTÉCNICAS REPRODUTIVAS APLICADAS AOS ANIMAIS DE LABORATÓRIO
Sexagem espermática em camundongos

Banca Examinadora

JANAINA BARCELOS PORTO FERREIRA
DOCENTE - PERMANENTE
Não
Nome Categoria
LUCIENE PASCHOAL BRAGA DIAS Docente - PERMANENTE
ANDRE LUIS RIOS RODRIGUES Participante Externo
ALESSANDRA DE ALMEIDA RAMOS Docente - PERMANENTE
RAFAEL BRANDAO VARELLA Participante Externo
CARLOS OTAVIO DE PAULA VASCONCELOS Participante Externo

Vínculo

Servidor Público
Empresa Pública ou Estatal
Outros
Não

Produções Intelectuais Associadas

Não existem produções associadas ao trabalho de conclusão.