O objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos da troca diária do diluente no sêmen refrigerado ovino, avaliando sua ação na viabilidade dos espermatozoides. Para o estudo, formou-se um pool de sêmen com três ejaculados, de três carneiros da raça Dorper, após a avaliação subjetivas dos parâmetros espermáticos. O pool de sêmen foi diluído no meio Glicina-Gema-Leite (GGL), na proporção 1:4, para posterior fracionamento nos grupos controle (controle GGL), grupo TGG (teste GGL) e grupo TDD (pós-ressuspensão). Após a diluição, submeteu-se as amostras ao processo de refrigeração a 5°C, em Botutainer®. No intervalo de 24 horas, realizou-se a avaliação de uma alíquota de cada amostra por 5 dias, agrupando-as em 6 momentos (0h), (24h), (48h), (72h), (96h) e (120h). O processo de resssuspensão do pellet de espermatozoides em diluente fresco foi repetido diariamente até o grupo TG atingisse o mínimo de ≥ 30% de MP, mediante análises subjetivas no microscópio óptico. O grupo controle apresentou menor motilidade e vigor espermático, e seus SPZ obtiveram maior percentual de defeitos morfológicos que os SPZ dos grupos TG e TDD. Também, apresentou maior concentração da enzima AST, que foi correlacionada com o aumento do percentual de lesão de acrossomo nos SPZ, e do menor consumo de frutose durante o processo. A adição do diluente novo cada 24 horas apresentou efeito positivo sobre os SPZ, uma vez que o grupo TG preservou os parâmetros espermáticos por 120 horas. No quinto dia de avaliação, sua MP foi equivalente a 32%, vigor 3,20, 67,30% de SPZ com membrana íntegra e concentração de 184,3 x 106 de SPZ viáveis por mL antes da centrifugação. No grupo TDD, os valores apresentados foram de 37% de MP, vigor 4,40, 66% de SPZ com membrana íntegra e concentração de 175,8 x 106 de SPZ viáveis por mL, e um consumo de frutose 19,00 mg/ml. Este foi maior durante o tempo de avaliação do estudo demostrando um maior aproveitamento desse substrato pelos espermatozoides. Isso demonstrou que a troca diária de diluente foi eficiente para preservar a viabilidade espermática por um maior período de tempo.