Dados do Trabalhos de Conclusão

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO PAULO
MEDICINA (UROLOGIA) (33009015021P1)
INFLUÊNCIA DO MEIO DE CULTIVO CONDICIONADO DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS NO DESENVOLVIMENTO EMBRIONÁRIO MURINO ATÉ O ESTÁGIO DE BLASTOCISTO
LARISSA BERIONI RODRIGUES DA SILVEIRA
DISSERTAÇÃO
22/05/2018

Objetivo: Avaliar a influência do meio de cultivo condicionado de células-tronco mesenquimais de endométrio no cultivo embrionário Método: 544 embriões murinos foram divididos em 3 grupos, sendo eles: controle, somente meio de cultivo embrionário; suplementado, meio de cultivo embrionário acrescido de meio IMDM condicionado em cultura de células-tronco mesenquimais de endométrio; e controle negativo meio de cultivo embrionário comum acrescido de meio IMDM. O desenvolvimento embrionário foi avaliado em cada um dos grupos e os meios de cultivo foram coletados para realização da análise metabolômica por espectrometria de massas. Os dados foram normalizados por Z-score e submetidos aos testes de PCA e PLS-DA no programa Metaboanalyst 3.0, para se identificar os marcadores moleculares. Resultados: Na comparação entre os três grupos, o grupo Controle apresentou maior taxa de blastocisto (quantidade de blastocistos em D6/quantidade de zigotos cultivados) no sexto dia de cultivo em relação aos grupos Suplementado e Controle Negativo (0,3 ± 0,160; 0,01±0,01; 0,00±0,00, respectivamente), enquanto paralelamente a taxa de degenerados (quantidade de blastocistos em D6/quantidade de zigotos cultivados) foi maior nos dois últimos grupos no mesmo período (0,70 ± 0,16; 1,00 ± 0,01; 0,88 ± 0,35, respectivamente). A análise metabolômica dos meios de cultivo mostraram que todos os 15 metabólitos encontrados estavam mais abundantes no grupo Suplementado, dos quais 5 foram possíveis de atribuir para a classe dos Liso - Fosfatidilinositol Fosfato, Liso-Fosfatidilglicerol, Fosfatidilinositol Fosfato e Liso-Fosfatidilinositol. A comparação posterior feita apenas entre os grupos Suplementado e Controle Negativo não apresentou diferença na taxa de blastocisto e degenerados no sexto dia de cultivo, porém a análise dos meios de cultivo mostrou que se manteve uma maior abundância dos metabólitos no grupo Suplementado, e dos 15 encontrados conseguimos atribuir para 5 deles as classes de Liso-Fosfatidilinositol Fosfato, Liso-Fosfatidilglicerol, Liso-Fosfatidilserina, Liso-Ácido Fosfatídico e Monoacilglicerol. Conclusão: Podemos concluir que o meio de cultivo condicionado influenciou negativamente o desenvolvimento embrionário, sugerindo que os fatores presentes no meio de cultivo das células-tronco podem estar relacionados a esse pior desenvolvimento. Além disso, os lipídeos com maior representação no grupo Suplementado estão relacionados principalmente à regulação do ciclo celular, indicando que essa maior representação pode estar relacionada à presença prévia de células-tronco.

Embriologia;Célula-tronco mesenquimal;Desenvolvimento embrionário;Cultivo celular
Objective: Evaluate the influence of the conditioned culture medium from endometrial mesenchymal stem cells in the embryonic cell culture Method: 544 murine embryos were divided in 3 groups: Control (regular embryonic culture medium); Supplemented (embryonic culture medium supplemented with conditioned IMDM medium after endometrial mesenchymal stem cell culture); and Negative Control (regular embryonic culture medium supplemented with IMDM medium). Embryonic development was evaluated in each group and culture media were collected for metabolomic analysis by mass spectrometry. The data were normalized by Z-score and submitted to the PCA and PLS-DA tests using the software Metaboanalyst 3.0, to identify the molecular markers. Results: In the comparison between the three groups, the Control group presented a higher blastocyst rate on the sixth day of embryo culture in relation to the Supplemented and Negative Control groups (0,3 ± 0,160; 0,01±0,01; 0,00±0,00, respectively) , while the rate of degenerate was higher in the last two groups in the same period (0,70 ± 0,16; 1,00 ± 0,01; 0,88 ± 0,35, respectively). The metabolic analysis of the embryo culture media showed that all 15 metabolites found were more abundant in the Supplemented group, of which 5 were related to the class of L - Phosphatidylinositol Phosphate, L - Phosphatidylglycerol, Phosphatidylinositol Phosphate and L - Phosphatidylinositol. The subsequent comparison between the Supplemental and Negative Control groups showed no difference between the blastocyst and degenerate rates on the sixth day of embryo culture, but the analysis of the culture media showed that a greater abundance of the metabolites was maintained in the Supplemented group. Out of the 15 metabolites found, we were able to assign 5 of them to the classes of L-Phosphatidylinositol Phosphate, L-Phosphatidylglycerol, L-Phosphatidylserine, L-Phosphatidic Acid and Monoacylglycerol. Conclusion: The conditioned culture medium negatively influenced the embryonic development, suggesting that the factors in the culture medium of the stem cells may be related to the worse embryo development. In addition, the lipids with higher representation in the Supplemented group are mainly related to the regulation of the cell cycle, which may be related to the previous presence of stem cells.
embryology;mesenchymal stem cell;embryonic development;cell culture
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PORTUGUES
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO PAULO
O trabalho possui divulgação autorizada

Contexto

REPRODUÇÃO HUMANA E ANDROLOGIA
ESTUDO DO DESENVOLVIMENTO EMBRIONÁRIO, DE CÉLULAS-TRONCO EMBRIONÁRIAS E MESENQUIMAIS E DE CÉLULAS DE PLURIPOTÊNCIA INDUZIDA
Aplicação de tecnologia pós-genômica para o estudo de cultivo in vitro de embriões e células-tronco embrionárias.

Banca Examinadora

EDSON GUIMARAES LO TURCO
DOCENTE - PERMANENTE
Não
Nome Categoria
ADRIANO FELIPE PEREZ SIQUEIRA Participante Externo
RENATO FRAIETTA Docente - PERMANENTE
MAURICIO DE ROSA TROTTA Participante Externo

Financiadores

Financiador - Programa Fomento Número de Meses
FUND COORD DE APERFEICOAMENTO DE PESSOAL DE NIVEL SUP - Programa de Demanda Social 24

Vínculo

CLT
Empresa Privada
Empresas
Não