Com o objetivo de aumentar o ganho genético e melhorar a qualidade do rebanho brasileiro, faz-se necessário o uso de biotécnicas da reprodução. Cerca de 99,9% dos folículos que compõe a reserva folicular ovariana não chegam ao seu estágio de maturação final, estes sofrem um processo denominado atresia, havendo grande perda folicular. Com o objetivo de garantir um melhor aproveitamento dos folículos pré-antrais, o cultivo in vitro destes folículos permite seu desenvolvimento, crescimento e possivelmente seu posterior uso. Uma vez otimizado, esta técnica permitie a obtenção da ovulação in vitro, além da produção de embriões a partir desses oócitos ovulados. O meio de cultivo tem grande influencia na ativação e desenvolvimento folicular, assim como o sistema de cultivo aplicado. O hormônio folículo estimulante (FSH) tem papel importante no crescimento e maturação folicular, agindo nas células da granulosa dos folículos que compõe a reserva folicular. Assim como o sistema bidimensional, promove um ambiente semelhante ao ovário, mimetizando sua arquitetura. Dessa forma, o objetivo do presente estudo, ao combinar um sistema de cultivo bidimensional e a suplementação com FSH, haja um desenvolvimento folicular superior ao material cultivado em apenas meio base. Foram utilizados ovários de vacas cíclicas (n= 6), retirados os tecidos circundantes e os ligamentos, e separados os pares de cada animal. Em seguida, foram feitos fragmentos de 3X3X3 mm no córtex ovariano. Para cada par de ovário, foi selecionado um fragmento aleatório e imediatamente foi fixado em Bouin representando assim, o grupo controle não cultivado, D0. Os fragmentos restantes (n= 8 fragmentos, de cada animal) foram transportados até o laboratório e cultivados individualmente nos diferentes tratamentos em alíquotas de 1 mL de meio de cultivo em placas de cultivo de 24 poços em estufa a 38,5ºC, numa atmosfera de 5 % de CO2 em ar e umidade saturada. O meio de cultivo controle constituiu de MEM, 0,23 mM de piruvato, 2 mM glutamina, 2 mM hipoxantina, 1,25 mg/mL de albumina sérica bovina (BSA Gibco BRL, Rockville, MD, USA), 20 UI/mL de penicilina e 200 mg/mL de estreptomicina. Para os tratamentos, o meio MEM+ foi suplementado com diferentes concentrações (50, 100 ou 200 ng/mL) de FSH (Folltropin®, Bioniche Canadá Inc, Ontário, Canadá). Oito fragmentos, do córtex ovariano de cada animal, foram cultivados nos meios testado por seis (D6) ou doze (D12) dias. A cada intervalo de dois dias, o meio de cultivo foi substituído por meio fresco. Os folículos pré-antrais foram classificados de acordo com o estágio de desenvolvimento (primordial, primário, secundário) e quanto à morfologia (normal ou degenerado). Os dados analisados foram submetidos à ANOVA e teste de Tukey (p≤0,05). No estudo realizado, foi possível observar uma diferença significativa na proporção de folículos ovarianos primordiais e em desenvolvimento, sugerindo assim a provável ocorrência de uma ativação destes folículos cultivados in vitro. A concentração que melhor apresenta condições para o desenvolvimento folicular e garantiu a manutenção da integridade folicular foi 50 μg/ml de FSH em 12 dias de cultivo.