Os antiparasitários, como as avermectinas e o fipronil, são largamente utilizados na bovinocultura de corte para controlar infestações por endo e ectoparasitas. Os ionóforos, entre eles a monensina, são também largamente utilizados em bovinos como aditivos promotores de crescimento. Porém, o uso de medicamentos em animais produtores de alimentos pode levar ao aparecimento de resíduos desses na carcaça. Os laboratórios que realizam análises de resíduos de medicamentos veterinários em alimentos necessitam ter capacidade técnica e as metodologias analíticas utilizadas devem ser validadas por um processo que define os requisitos analíticos e confirma que o método investigado é capaz de ser executado consistentemente. Com o objetivo de atender ao monitoramento da presença de resíduos em produtos de origem animal, um método analítico quantitativo e confirmatório para pesquisa de resíduos de monensina, fipronil, fipronil sulfona e avermectinas em fígado bovino, por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (UHPLC/MS-MS), foi desenvolvido, otimizado e validado. Também foi realizada a expansão do escopo analítico para fígado de frango. O método foi avaliado pelos seguintes parâmetros de desempenho: seletividade, linearidade, precisão, exatidão, limites de detecção (LD) e de quantificação (LQ), limite de decisão (CCα), capacidade de detecção (CCβ), robustez e incerteza da medição. A metodologia analítica apresentou seletividade para todos os analitos, exceto para ivermectina; alta linearidade com coeficiente de correlação (r) superior a 0,911; precisão satisfatória nos ensaios de repetibilidade e de reprodutibilidade; e exatidão adequada, com recuperações médias variando entre 88,6 e 113,8%. Na avaliação da robustez, as variações efetuadas no procedimento de extração foram relevantes no nível de concentração estudado e o método foi robusto para análise de todos os analitos, exceto fipronil e eprinomectina. A incerteza de medição combinada foi satisfatória nas concentrações de 0,5; 1,0 e 1,50 vezes o LMR para todos os analitos estudados. A expansão de escopo do método analítico validado para inclusão da matriz fígado de frango apresentou resultados aceitáveis para todos os analitos nos parâmetros de linearidade, precisão (CV < 15,9% para repetibilidade e CV< 20,2% para reprodutibilidade); exatidão e incerteza de medição (1,04 a 3,06 μg kg-1). Concluiu-se que método de UHPLC/MS-MS apresentou as características de desempenho necessárias, sendo adequado para a pesquisa de resíduos de monensina, fipronil, fipronil sulfona e avermectinas em fígado bovino, bem como em fígado de aves.