Fatores produzidos no ovário, como os membros da família dos fatores de crescimento
transformantes beta (TGFβ) e seus receptores, exercem papel essencial durante a
divergência folicular e ovulação. Interações entre ligantes e seus receptores estão
envolvidas em distintas funções ovarianas sob condições fisiológicas ou patológicas.
Em especial os fatores produzidos pelos oócitos como a proteína morfogenética óssea
15 (BMP15) e o fator de crescimento e diferenciação 9 (GDF9), desempenham papéis
importantes na regulação das funções ovarianas como crescimento e diferenciação
folicular. Entretanto, grande parte do conhecimento sobre esses fatores tem sido
obtido em modelos in vitro ou através da observação de mutações espontâneas em
ovelhas e, apesar da grande relevância, a função destes na fisiologia ovariana ainda
é pouco conhecida. Além disso, o papel do sistema TGFβ na modulação do processo
de regressão do corpo lúteo ainda não foi investigado nas espécies domésticas. Neste
contexto, esta tese apresenta uma série de estudos acerca da participação de
membros da família TGFβ, em especial das BMPs, na regulação de eventos ovarianos
envolvendo o crescimento folicular final, ovulação, formação do corpo lúteo e luteólise.
O primeiro estudo trata-se de uma revisão que teve por objetivo reunir a informação
disponível na literatura sobre o tema. Posteriormente, um segundo estudo objetivou
investigar o nível de transcritos de membros da família TGFβ e seus receptores
durante a luteólise induzida in vivo. Foram utilizadas amostras de corpos lúteos
bovinos coletados in vivo nos momentos 0, 2, 12, 24 e 48 h após a administração de
uma dose de PGF2α no dia 10 do ciclo estral. Os níveis de RNAm de BMP4, BMP6 e
INHBA foram regulados positivamente às 2 h após a administração de PGF2α
(P<0,05) em comparação com 0 h. A expressão relativa de RNAm de BMP2, BMP4,
ACVR1B, INHBA e INHBB foi regulada positivamente 12 h após a aplicação de PGF2α
(P<0,05), enquanto que o TGFBR3 teve uma regulação negativa às 48 h.
Coletivamente os dados demonstram que os RNAm de membros da família TGFβ são
regulados pelo tratamento com PGF2α, sugerindo um envolvimento no processo de
luteólise funcional e morfológica em bovinos. Em um terceiro estudo, objetivou-se
determinar o efeito da injeção intrafolicular da BMP15 sobre o crescimento folicular
final e ovulação/luteinização. Ainda, avaliou-se o efeito do tratamento com
gonadotrofinas em células da granulosa cultivadas in vitro, sobre o nível de transcritos
dos receptores da BMP15. Foi realizada a injeções intrafoliculares de BMP15rh nas
concentrações de 100 ng/mL, em folículos dominantes, e de 500 ng/mL, em folículos
pré-ovulatórios. Os resultados da injeção intrafolicular de BMP15rh demonstram uma
tendência (P=0,09) de inibição do crescimento folicular. Já os resultados em folículos
pré-ovulatórios suportam a hipótese de um efeito inibitório sobre o crescimento
folicular e ovulação, sem inibir a luteinização. Folículos tratados com BMP15 não
ovularam e deram origem a estruturas císticas luteinizadas, o que foi confirmado
através de dosagens de progesterona sérica. No cultivo das células da granulosa in
vitro, a expressão de RNAm de BMPR2 e BMPR1B não foi alterada pelo tratamento
com LH ou FSH. Conclui-se que o tratamento com BMP15 inibe o desenvolvimento
folicular e a ovulação, induzindo à luteinização e formação de cistos em bovinos.
Estudos moleculares futuros são necessários para elucidar os mecanismos de ação
da BMP15. Um quarto estudo foi conduzido com o objetivo de validar um método de
coleta in vivo de células da granulosa bovinas, para estudos de expressão gênica.
Foram testados seis protocolos distintos de separação das células após a coleta,
buscando a forma mais adequada para a extração do RNA, sem interferência de
outras células eventualmente presentes nas amostras. A partir dos resultados sugerese que o tratamento dos pellets celulares obtidos após aspiração folicular com tampão
de lise de eritrócitos possibilita uma melhor qualidade de RNA. Com um protocolo
adequado de processamento das células, pode-se dar continuidade à investigação
dos efeitos dos fatores foliculares nas células da granulosa in vivo. Coletivamente, os
estudos acima descritos, além da gerar conhecimento básico para compreensão do
papel dos fatores locais na fisiologia ovariana, podem contribuir no entendimento de
processos patológicos e no desenvolvimento de tecnologias que tenham por finalidade
a contracepção ou aumento da taxa ovulatória.