O mosquito Ae. aegypti é o principal vetor de arboviroses para humanos, no Brasil e o responsável por surtos de dengue, chikungunya, febre amarela, e recentemente esteve envolvido no elevado numero de infectados com vírus zika. O hábito hematofágico do Ae. aegypti permitiu que desenvolve-se inúmeras estratégias de controle da hemostasia do seu hospedeiro vertebrado. Em 2010, o nosso grupo expressou e caracterizou um inibidor de serinopeptidase da família Kazal denominado de AaTI (Aedes aegypti Trypsin Inhibitor). O rAaTI purificado foi capaz de inibir tripsina e afetar o tempo de coagulação. De posse destes dados, o presente trabalho teve como objetivo geral determinar a estrutura tridimensional do AaTI para entender o seu papel no prolongamento do tempo de coagulação. O rAaTI foi purificado em quantidade e uma preparação contendo 20 mg/mL do inibidor com alto grau de homogeneidade foi utilizado em experimentos de cristalização. O rAaTI cristalizou em 100 mM acetato de sódio, pH 5,5 contendo 25% PEG 3350; 5% PEG 400 and 3% dioxana. Alguns cristais do inibidor foram mergulhados em soluções de iodeto de sódio com diferentes concetrações (soaking), por 10 s a 1 min, em seguida os mesmos foram analisados (difratados) na linha MX2 no laboratório Nacional de Luz Syncrotron (LNLS), Campinas. A estrutura tri-dimensional do rAaTI foi determinada em alta resolução de 1.4 Å. A célula unitária do cristal apresentou um volume de solvente incomum baixo de aproximadamente 22-23% (Torquato et al. 2017), acomodando duas moléculas do rAaTI. O rAaTI foi anteriormente descrito como inibidor de serinoprotease, tripsina bovina ( Ki = 0,15 nM) e plasmina humana (Ki = 3,8 nM ), e com atividade 71 anticoagulante, promovendo o prolongamento do tempo de coagulação, incluindo o teste de tempo de trombina (TT) (Watanabe et al. 2010). Na tentativa de esclarecer onde o rAaTI se liga na superfície da trombina, alguns experimentos foram realizados usando a tecnologia “ SPR “ (do inglês – surface plasmon resonance). A trombina foi imobilizada sobre a superfície do sensor-chip CM5TM GE. Diferentes concentrações de rAaTI foram aplicadas a superfície com a trombina imobilizada e uma constante de dissociação (KD) de 3,68 µM foi obtida. Watanabe e colaboradores mostraram um valor de KD = 320 nM (Watanabe et al. 2011). A constante de dissociação calculada por SPR é aproximadamente dez vezes maior, que pode ser explicado pelo bloqueado parcial dos exositios I e II da trombina durante o procedimento de imobilização da enzima. Os experimentos de SPR mostraram inibição da ligação de rAaTI a trombina na presença da heparina, reforçando a sugestão de que o AaTI pode se ligar ao exositio II da trombina.