Dados do Trabalhos de Conclusão

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO PAULO
CIÊNCIAS BIOLÓGICAS (BIOLOGIA MOLECULAR) (33009015001P0)
Estudo do Envolvimento da Metalo-Peptidase Phex em Processos Tumorais
RAQUEL LEAO NEVES
TESE
29/03/2018

Mutações no gene PHEX (phosphate-regulating gene with homologies to endopeptidase on the X chromosome) resultam em uma forma prevalente (1: 20.000) de raquitismo humano hereditário denominada XLH (X-Linked Hypophosphataemia). A XLH é caracterizada por deficiência na reabsorção de fosfato, metabolismo da vitamina D e defeitos na mineralização óssea. Utilizando diversas metodologias e o modelo murino da XLH, o Hyp mouse, identificamos a OPN (osteopontina) como o primeiro substrato fisiológico da PHEX. A OPN é uma fosfoglicoproteína multifuncional com atividades tecido-específicas que, dentre suas funções, pode atuar no osso como um potente inibidor da mineralização óssea, e em tumores, como promotora da progressão tumoral. Neste contexto, ampliamos nossos estudos desta protease no carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço (HNSCC). No presente trabalho, demonstramos pela primeira vez a elevada expressão de PHEX em células tumorais não ósseas (SCC22B). Descrevemos também a modulação da OPN tumoral (SCC22B-OPN) pela PHEX exógena, e caracterizamos a presença temporal da proteína PHEX na membrana devido a ação de cisteíno-proteases. No intuito de progredir na compreensão do papel da PHEX nas células SCC22B, foram realizados ensaios de colocar em português (wound-healing) em dois diferentes modelos de células SCC22B construídos por nosso grupo, SCC22B shRNA-PHEX (expressão do gene PHEX reduzida) e SCC22B secPHEX (superexpressão da forma secretada da PHEX). As análises realizadas indicaram que quando comparadas a SCC22B, a linhagem SCC22B secPHEX apresentou redução na migração celular, enquanto que um considerável aumento foi observado nas células SCC22B shRNA-PHEX. Recentemente, desenvolvemos também uma terceira linhagem que superexpressa a PHEX com o domínio transmembrana íntegro (SCC22B mbPHEX), e que está sendo caracterizada para realizar uma análise comparativa com os outros dois modelos. Por fim, demonstramos a co-expressão de PHEX e OPN nas células de leucemia Jurkat, Kasumi, KG-1, K-562 e Lucena (modelos de tumores não-sólidos). Os resultados obtidos representam um avanço na caracterização funcional da PHEX, e demonstram que a sua expressão e/ou função não está restrita apenas a tecidos mineralizados.

1. PHEX, 2. XLH, 3. Squamous Cell Carcinoma, 4. Osteopontina, 5. Tumor
Mutations in PHEX gene result in a prevalent (1: 20,000) form of hereditary human rickets, the X-Linked Hypophosphataemia (XLH). XLH is characterized by deficiency in phosphate reabsorption and vitamin D metabolism, and defects in bone mineralization. Using several methodologies and the murine XLH model, we identified the OPN (osteopontin) as the first PHEX physiological substrate. OPN is a multifunctional phosphoglycoprotein with tissue-specific activities that, among its functions, can act in bone as a potent inhibitor of bone mineralization, and in tumors, as a promoter of tumor progression. Considering these data, we extended our studies of this protease in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). In the present work, we demonstrate for the first time the high expression of PHEX in non-bone tumor cells (SCC22B), and describe the modulation of tumor OPN (SCC22B-OPN) by exogenous PHEX and characterize the temporal targeting of the PHEX protein to SCC22B cell membrane. We have found that cysteine ​​proteases expressed in these cells can degrade/inactivate endogenous PHEX and the treatment of these cells with the E64 inhibitor results in increased of PHEX in membrane and the degradation of OPN tumor fragments (SCC22B-OPN). To better understand the role of PHEX in SCC22B cells, proliferation and migration assays were performed using the wound healing method in two different SCC22B cell models constructed in our laboratory, SCC22B shRNA-PHEX (reduced PHEX gene expression) and SCC22B secPHEX (overexpression of the secreted form of PHEX). The analyzes performed indicated that when compared to SCC22B, the SCC22B secPHEX cell lineage showed reduction in cell proliferation and migration, whereas a considerable increase was observed in SCC22B shRNA-PHEX cells. In addition to these two models, recently we have also developed a third line that overexpresses PHEX with the integral transmembrane domain (SCC22B mbPHEX) and is being characterized by our group. Finally, using the Jurkat, Kasumi, KG-1, K-562 and Lucena cell lineages, we also demonstrated the expression of PHEX/PHEX in leukemia cells (non-solid tumors). The results obtained represent an advance in the functional characterization of PHEX, and demonstrate that its expression and/or function are not restricted only to mineralized tissues.
1. PHEX, 2. XLH, 3. Squamous Cell Carcinoma, 4. Osteopontin, 5. Tumor
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PORTUGUES
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO PAULO
O trabalho não possui divulgação autorizada

Contexto

BIOFISICA
ESTRUTURA, ATIVIDADES E SINTESE DE PEPTIDEOS E PROTEINAS
BIOLOGIA MOLECULAR DE RECEPTORES

Banca Examinadora

NILANA MEZA TENORIO DE BARROS
DOCENTE - COLABORADOR
Sim
Nome Categoria
APARECIDA SADAE TANAKA Docente - PERMANENTE
FABIANA HENRIQUES MACHADO DE MELO Participante Externo
MIRIAM GALVONAS JASIULIONIS Participante Externo
WILLIAN FERNANDO ZAMBUZZI Participante Externo

Vínculo

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Sim