Resumo
Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da doença de Chagas e libera, a partir da
membrana plasmática, vesículas extracelulares (EVs) expressando os principais
glicoconjugados de superfície do parasita. EVs são partículas que contêm proteínas,
lipídios e ácidos nucleicos, e que são liberadas, em condições fisiológicas e
patológicas, por diferentes células e patógenos. No presente trabalho, purificamos,
isolamos e comparamos EVs, das formas tripomastigotas de cepas de T.cruzi, que
pertencem a diferentes unidades discretas de tipificação (DTU) e que possuem
diferente grau de virulência. Inicialmente, por microscopia eletrônica de varredura
(MEV), visualizamos a forma tripomastigota de T. cruzi liberando EVs a partir da
membrana plasmática, e tripomastigotas da cepa YuYu (DTU Tc I) apresentaram mais
partículas do que tripomastigotas da cepa Y (DTU Tc II). Depois, através da análise
de nanopartículas (NTA), caracterizamos as EVs com relação ao tamanho e
concentração. Não houve diferença significativa quando comparado o tamanho médio
(150nm) de EVs de ambas as cepas, mas a concentração de partículas em amostras
da cepa YuYu foi maior do que em amostras da cepa Y, confirmando a análise por
MEV. A análise qualitativa por immunoblotting mostrou que EVs de ambas as cepas
expressam transialidase (TS) e cruzipaína, mas a expressão é maior em EVs da cepa
YuYu. Por LC-MS/MS, foram detectados em EVs de ambas as cepas, os principais
glicoconjugados pertencentes às famílias multigênicas de T. cruzi, como as TS,
Mucinas, proteínas de superfície associadas à mucina (MASP), proteínas de
superfície GP63, entre outras, mas foi possível identificar mais diferentes proteínas
em EVs da cepa YuYu do que em EVs da cepa Y. As análises de fosfolipídios (FL) por
cromatografia de camada delgada (CCD), GC-MS e MALDI-TOF sugerem a presença,
em EVs, de FL como fosfatidilcolina (FC), fosfatidiletanolamina (FE), fosfatidilinositol
(FI) e fosfatidilserina (FS). A cepa YuYu, que é mais virulenta, libera mais EVs
contendo mais proteínas e expressando mais das moléculas que têm em comum com
EVs da cepa Y. Essa diferença pode ser importante na infectividade do parasita, uma
vez que EVs têm função de comunicação intercelular à distância e por contato direto,
e podem estar envolvidas em diferentes mecanismos, durante a interação parasitahospedeiro,
como invasão celular, imunomodulação e evasão do sistema imune do
hospedeiro.