Brasil

Dados do Trabalhos de Conclusão

UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE
Ciências e Biotecnologia (31003010079P0)
ALBUMINA E SUAS APLICAÇÕES EM FUTUROS PROTOCOLOS TERAPÊUTICOS NO TRATAMENTO DA LEPTOSPIROSE
CAMILA IGNACIO DA SILVA
DISSERTAÇÃO
17/11/2015

Considerando-se os aspectos clínicos e as alterações histopatológicas observadas na leptospirose, a hipótese de que a leptospira produza uma endotoxina, liberada durante sua lise em função à resposta imune do hospedeiro, tem sido investigada. A presença da fração glicolipoproteica da leptospira (GLP) pode estar associada à lesão nos tecidos, pois foi encontrada em sítios de lesão nos diferentes órgãos. A GLP tem como alvo biológico específico a Na+, K+-ATPase (NKA), e esta inibição está associada ao seu conteúdo lipídico, principalmente ao ácido oléico. A GLP e o ácido oléico podem estar envolvidos, ainda, na insuficiência renal, hepática e pulmonar observada em pacientes durante a infecção grave. A NKA é um complexo proteico situado na membrana, como também possui uma função de sinalização intracelular. Experimentos realizados in vivo pelo nosso grupo demonstraram o poder inibitório da GLP sobre a NKA em tecido pulmonar. Como a principal causa de morte de pacientes com leptospirose é a síndrome da angústia respiratória aguda, o presente trabalho tem o objetivo de estudar em células epiteliais humanas de pulmão (A549, pneumócitos tipo II) o efeito da GLP sobre a enzima NKA, avaliar a ativação de vias específicas de sinalização intracelular ligadas ao estresse e a inflamação durante a leptospirose bem como para avaliar se a albumina humana é capaz de reverter os efeitos da GLP. Assim, medimos a atividade da NKA por incorporação de Rb+ não radioativo pela células (Rb+ mimetiza o K+). A fosforilação da proteína p38 e Src foi avaliada por western blotting e a produção de citocinas foi medida por ELISA. Nossos resultados mostraram GLP foi capaz de inibir a NKA e que albumina humana impediu esta inibição. GLP induziu a ativação das proteínas p38 e Src como também estimulou a produção das citocinas IL-6 e IL-8, também impedida por albumina humana. A albumina humana tem dois efeitos benéficos impede a inibição NKA e evita a ativação da via intracelular com a produção de citocinas. Portanto, propomos que a administração de albumina pode ser utilizada como uma estratégia terapêutica potencial adjuvante para pacientes com leptospirose.

Leptospirose, albumina, ácidos graxos monossaturados, tratamento, protocolo terapêutico.
Considering the clinical and histopathological changes observed in leptospirosis, the hypothesis that leptospira produce an endotoxin released during lysis due to a host immune response has been investigated. The presence of the fraction of leptospiral glycolipoprotein (GLP) may be associated with tissue injury, since it was found in lesion sites in different organs. GLP specifically inhibits NKA activity, and this inhibition is related to its lipid content, particularly the non-esterified fatty acids such as oleic acid. GLP and oleic acid may be also involved in renal, hepatic and pulmonary lesions observed in patients during the severe infection. NKA is a protein complex located on the plasma membrane of eukaryotic cells, which uses the energy stored in the ATP molecule to transport Na+ and K+ across the plasma membrane, but also has, as recently described, a cell signaling function. In vivo experiments performed by our group demonstrated the inhibitory power of GLP on NKA in lung tissue. Since the main cause of death in patients with leptospirosis occurs due to acute respiratory distress syndrome. This work aims to demonstrate the inhibition of NKA by GLP in human epithelial lung cells (A549, pneumocytes type II), to study the activation of specific intracellular signaling pathways related to stress and inflammation in leptospirosis and evaluate if the albumin is able to reverse the effects of GLP these cells. Thus NKA activity was measured by non-radioactive Rb+ incorporation by cells (Rb+ is a K+ substitute). The phosphorylation of p38 and Src protein was assayed by western blot and the cytokine production was measured by ELISA. Our results showed GLP inhibited NKA and human albumin prevented its inhibition. GLP induced P38 and Src activation and stimulated the production of cytokine IL-6 and IL-8, also prevented by human albumin. Human albumin has two beneficial effects prevents NKA inhibition and avoids intracellular pathway activation with cytokine production. Therefore, we propose that albumin administration may be used as a potential adjuvant therapeutic strategy for patients with leptospirosi
Leptospirosis, albumin, monosaturated fatty acids, treatment, therapeutic protocol.
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PORTUGUES
UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE

Contexto

CIÊNCIAS E BIOTECNOLOGIA - INTERAÇÕES MOLECULARES, CELULARES E SISTÊMICAS
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Banca Examinadora

PATRICIA BURTH
Sim
Nome Categoria
LUIZ ROBERTO LEAO FERREIRA Docente
ALINE ARAUJO DOS SANTOS RABELO Participante Externo
DIOGO GOMES GARCIA Participante Externo
ADRIANA RIBEIRO SILVA Participante Externo

Vínculo

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Não