A brucelose é uma zoonose de distribuição mundial e acarreta importantes problemas sanitários e grandes prejuízos econômicos. Como parte de um acordo cooperativo entre diversos órgãos, a Secretaria de Agricultura, Abastecimento e Desenvolvimento Rural do Distrito Federal (Seagri) realizou, em 2015, um estudo transversal por amostragem com o objetivo de estimar a prevalência e analisar fatores de risco para brucelose bovina em seu território. O estudo teve o objetivo de subsidiar as estratégias do programa distrital para controle da enfermidade e promover ajustes nas atividades já realizadas, comparando os resultados encontrados com um estudo de prevalência realizado em 2003. As propriedades com criação de bovinos no Distrito Federal foram dividas em duas subpopulações, de acordo com o tamanho do rebanho. A primeira subpopulação foi formada por propriedades com até 15 (quinze) fêmeas com mais de 24 (vinte e quatro) meses, isto é, em idade reprodutiva. A segunda subpopulação, de rebanhos maiores, foi constituída por propriedades com 15 (quinze) ou mais fêmeas em idade reprodutiva. Para cada subpopulação foi amostrado aleatoriamente um número pré-estabelecido de propriedades. Em cada uma dessas propriedades, foi amostrado, também aleatoriamente, um número pré-estabelecido de fêmeas com mais de 24 (vinte e quatro) meses e aplicado um questionário com o objetivo de identificar fatores de risco associados com a presença da doença. Os animais selecionados foram submetidos ao teste do Antígeno Acidificado Tamponado – ATT, como teste de triagem e ao 2-Mercaptoetanol, como confirmatório. No total, foram amostradas 344 propriedades e 2.247 animais. A prevalência estimada de focos de brucelose para o Distrito Federal foi de 3,1% [IC 95%: 1,31%; 4,9%] e de animais foi de 0,93% [IC 95%: 0,16%; 1,71%]. As prevalências médias de focos e de animais não apresentaram diferenças estatisticamente significantes entre as duas subpopulações, apesar da identificação de tendência de prevalências maiores em rebanhos maiores. O único fator de risco associado à condição de foco foi a aquisição de animais com finalidade de reprodução, apresentando um valor de OddsRatio de 14,3 [IC 95%: 3,04; 67,2]. O Distrito Federal deve pensar em estratégias de erradicação da doença em seu território, com intensificação do diagnóstico e eliminação dos animais positivos.