Este estudo teve como objetivo avaliar in vitro a atividade dos extratos e frações obtidos das folhas de Digitaria insularis sobre nematódeos gastrintestinais de caprinos através do ensaio de inibição de eclosão de ovos e motilidade larvar, e investigar a sua toxicidade em culturas de células Vero, utilizando-se os testes do brometo de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) - 2,5-difenitetrazólio (MTT) e de exclusão ao corante Azul de Tripan. As concentrações testadas sobre ovos variaram de 0,15 - 2,5 mg/mL para os extratos hidroetanólico bruto (HB), acetato de etila (AE), butanólico (BT) e hidroetanólico residual (HR) e de 0,3 - 0,9 mg/mL para o hexânico (HE). Os extratos que se mostraram mais ativos (HE e AE) foram fracionados em coluna aberta recheada com sílica gel para identificação dos constituintes químicos. As frações do HE foram testadas na concentração mais ativa do extrato de origem (0,9 mg/mL). Para as frações 1 (FR1AE), 4 (FR4AE), 5 (FR5AE) e 6 (FR6AE) do AE, utilizou-se a maior concentração previamente testada com o AE (2,5 mg/mL); a fração 2 (FR2AE) foi testada nas concentrações entre 0,08 - 1,3 mg/mL e para a fração 3 (FR3AE) foram empregadas as mesmas concentrações testadas para o AE (0,15 a 2,5 mg/mL). No teste de motilidade larvar, todos os extratos foram avaliados em única concentração de 10 mg/mL, não apresentando efeito larvicida. Para a avaliação de citotoxicidade, foram empregadas a maior concentração (2,5 mg/mL) utilizada para HB, BT e HR; enquanto que para os extratos HE e AE e frações FR2AE e FR3AE, foram utilizadas as mesmas concentrações do teste ovicida. Todos os extratos testados e as frações FR2AE e FR3AE, promoveram inibição da eclosão de ovos de forma concentração dependente. As CE50 (Concentração efetiva 50%) sobre ovos foram: 0,64; 0,55; 0,69; 0,77; 0,96; 0,27 e 0,65 mg/mL para os extratos HB, HE, AE, BT, HR e as frações FR2AE e FR3AE, respectivamente. Todos os extratos e frações que apresentaram eficácia anti-helmíntica foram avaliados quanto à citotoxicidade e apenas o HE, AE, FR2AE e FR3AE demonstraram ação citotóxica, com CI50 (Concentração inibitória 50%) de 0,8 mg/mL, 1,18 mg/mL; 1,65 mg/mL e 1,59 mg/mL, respectivamente para ensaio de MTT. Somente os HE, AE e FR2AE resultaram em inviabilidade celular com a degradação da membrana, nas maiores concentrações testadas. A análise química da fração ativa (FR2AE) foi realizada através de Cromatografia Líquida acoplada a Espectrômetro de Massas/Massas (CL-EM/EM) e conduziu à caracterização de dois flavonoides (tricina e diosmetina). Os resultados obtidos neste estudo evidenciam o potencial anti-helmíntico da D. insularis e sugerem que a atividade ovicida possa estar relacionada à presença das flavonas identificadas na FR2AE.