Brasil

Dados do Trabalhos de Conclusão

UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE
Ciências e Biotecnologia (31003010079P0)
DESENVOLVIMENTO DE UM TESTE RÁPIDO PARA DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO DE LEPTOSPIROSE UTILIZANDO EXTRATO BRUTO DE Leptospira interrogans
HEVANDRO DE SOUZA CAMPOS
DISSERTAÇÃO
29/09/2016

A leptospirose é uma zoonoze causada por bactérias do gênero Leptospira. São descritas mais de 250 sorovares em 21 espécies, estando Leptospira interrogans incluída dentre as patogênicas. As leptospiras são prevalentes em todos os continentes, particularmente em países em desenvolvimento, constituindo um problema sanitário de grande importância. Devido ao amplo potencial de disseminação destas bactérias, a doença se torna letal em um curto período pós-infecção e, com isso, há a necessidade do diagnóstico em tempo curto para o início de um tratamento eficaz. Nosso trabalho propôs desenvolver um teste sorológico, utilizando extrato bruto bacteriano, para o diagnóstico rápido da leptospirose, baseando-se na técnica de imunocromatografia de fluxo lateral (IFL), que tem sido aplicado com êxito para o diagnóstico de várias doenças, além de apresentar baixo custo, rapidez e praticidade, com elevada sensibilidade e estabilidade. Esse teste utiliza o princípio da permeabilidade entre as membranas intimamente associadas, onde a amostra biológica e o conjugado de anti-IgM marcado com ouro coloidal são ligados entre si, emitindo um sinal colorimétrico, tornando o resultado visivelmente revelado. Utilizando lisado de Leptospira interrogans, foram avaliadas as frações solúvel (SL) e insolúvel (IN), devidamente caracterizadas quanto ao perfil de polipeptídeos por SDS-PAGE, e imunogenicidade. Houve uma predominância de bandas de baixa massa molecular, com maior reatividade para a fração IN. Na IFL, esta fração também apresentou os maiores percentuais de positividade (97%) dentre os pacientes com leptospirose e negatividade (97%) em pacientes sem a doença, cujos soros foram previamente caracterizados por outro método. Apesar da elevada especificidade (100%), o teste apresentou uma baixa sensibilidade (53%) utilizando a fração SL, com valores preditivos positivo e negativo de 100% e 68%, respectivamente. A fração IN apresentou valor de 97% para todos os parâmetros analisados. A fração IN pode ser uma importante ferramenta no desenvolvimento de novas tecnologias para o diagnóstico da leptospirose.

Leptospirose, ensaio de fluxo lateral, diagnóstico imunológico
Leptospirosis is a zoonotic disease caused by bacteria of the genus Leptospira, there are currently more than 250 serovars have been described within 21 species and Leptospira interrogans has been included among the pathogenic group. Leptospiras are prevalent on every continent, particularly in developing countries, which is a health problem of great importance. Because of the boad potential for spread of these bacteria, the disease becomes lethal in a short post-infection period and, therefore, it has been required the diagnosis in a short time for the start of effective treatment. Our work aims to develop a serological test using bacterial crude extract for the rapid diagnosis of leptospirosis, based on the lateral flow immunocromatography assays (LFI), which has been successfully applied to the diagnosis of various diseases, featuring low cost, speed and practicality, with high sensitivity and stability. This test is based on the principle of permeability among closely associated membranes, where the biological sample and the colloidal gold-labelled antiIgM conjugate are bound each other and a color signal is raised , making the result visibly revealed. Using Leptospira interrogans lysates, the soluble (SL) and insoluble (IN) fractions were avaluated. They were properly characterized according to polypeptides profile by SDS-PAGE as well as immunogenicity. There was a predominance of low molecular mass bands, with higher reactivity to the IN fraction. In the LFI, this fraction also showed the highest positivity values (97%) among the patients with leptospirosis and negativity (97%) in patients without the disease, whose serum samples were previously characterized by another method. Despite the high specificity (100%) the test shows low sensitivity (53%) using the SL fraction with positive and negative predictive values of 100% and 68%, respectively. The IN fraction showed a value of 97% for all parameters. IN fraction may be an important tool for both research and development of new technologies for the leptospirosis diagnosis.
Leptospirosis, lateral flow assay, immunologic diagnosis
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PORTUGUES
UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE

Contexto

CIÊNCIAS E BIOTECNOLOGIA - INTERAÇÕES MOLECULARES, CELULARES E SISTÊMICAS
ANÁLISE MOLECULAR, CELULAR E/OU SISTÊMICA DE PROCESSOS BIOLÓGICOS E BIOTECNOLÓGICOS
A ANÁLISE DO PERFIL CELULAR E DE NOVOS DERIVADOS EM SISTEMAS BIOLÓGICOS DE IMPORTÂNCIA MÉDICA

Banca Examinadora

PATRICIA BURTH
Sim
Nome Categoria
RAFAEL DE OLIVEIRA RESENDE Participante Externo
NARA MAZARAKIS RUBIM Participante Externo
DIOGO GOMES GARCIA Participante Externo
LUIZ ROBERTO LEAO FERREIRA Docente
GERSON SILVA DE LIMA Participante Externo

Financiadores

Financiador - Programa Fomento Número de Meses
UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE - Programas de Fomento a Pesquisa 12

Vínculo

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Não