O hipotireoidismo congênito (HC) é a causa mais comum de retardo mental que pode ser evitado com tratamento precoce, com frequência de 1/2500 crianças nascidas vivas. O HC pode ter origem em falhas no desenvolvimento da tireoide (disgenesias) ou defeitos na síntese hormonal (disormonogêneses). As mutações mais frequentes associadas às disormonogêneses estão localizadas no gene da tireoperoxidase (TPO). Estas mutações podem promover a substituição, deleção ou adição de aminoácidos provocando perda de atividade por alterações estruturais da proteína e/ou de localização no tireócito. O objetivo deste projeto foi realizar o estudo funcional das mutações p.Gly319Glu,p. Ala909Thr;Ala911fs*49, p.Gln660Glu e p.Cys296Alafs*21 identificadas no gene da TPO em pacientes brasileiros com hipotireoidismo congênito por disormonogenese com defeito de incorporação parcial de iodeto ou bócio fetal. Para os estudos funcionais foi utilizado plasmídeo contendo o gene da TPO selvagem e as mutações foram introduzidas por mutagênese sítio dirigida. As proteínas foram expressas em células de mamíferos HEK293 após 72 horas da transfecção transiente, utilizando polifectaminas e cotransfectando com o plasmídeo pmaxGFP para determinar a eficiência da técnica. Foi avaliada a atividade enzimática da TPO utilizando o kit Amplex red (Invitrogen, Carlsbad, CA EUA), o tamanho das proteínas mutadas por western blot e a localização celular por imunofluorescência, sempre comparando com a expressão da proteína selvagem. A análise enzimática demonstrou menor atividade extracelular em todas as proteínas mutadas quando comparada com a da TPO selvagem (p<0,05). Observou-se que as mutações p.Gly319Glu, p.Gln660Glu p. Ala909Thr;Ala911fs*49, e p.Cys296Alafs*21 promoveram perdas de atividade de 35,3%, 38,7%, 44,30% e 49,2%, respectivamente, em relação a TPO selvagem,. No Western blot foi verificada que as proteínas com as mutações p.Gly319Glu e p.Gln660Glu possuem tamanhos molecular similares à proteína selvagem com 103 kDa, a proteína mutante p.Ala909Thr;Ala911fs*49 aproximadamente 108 kDa devido a incorporação de 49 novos aminoácidos, e na deleção p.Cys296Alafs*21 35 kDa, confirmando ser uma proteína truncada no exon 8. Por imunofluorescência foi demonstrado que todas as proteínas mutadas são expressas, no entanto, com exceção da p.Gln660Glu todas as proteínas mutadas apresentaram menor imunomarcação na membrana plasmática quando comparadas à selvagem. Concluímos, portanto, que as alterações na TPO causadas pelas mutações estudadas diminuem a capacidade catalítica da enzima e/ou a sua correta localização na membrana plasmática podendo explicar o quadro de HC por defeito de síntese hormonal observado em todos os pacientes portadores das mutações. Além disso, a atividade enzimática intermediária da TPO e a presença de TPO mutada (p.Gly319Glu e p.Gln660Glu, p.Ala909Thr;Ala911fs*49) na membrana plasmática permitem explicar o quadro de HC menos severo confirmado pelo defeito parcial de incorporação de iodeto. Mais estudos são necessários para podermos compreender a presença do bócio fetal nos pacientes portadores da p.Cys296Alafs*21, que deve estar associado a um defeito muito severo de síntese hormonal.