Relatos indicam que as aquaporinas (AQPs), em especial a AQP3, podem estar
envolvidas no processo de formação do antro em folículos ovarianos, no entanto, essa
informação ainda não foi completamente comprovada. Portanto, este trabalho teve como
objetivo investigar a participação da AQP3 no desenvolvimento de folículos ovarianos
ovinos cultivados in vitro, após o silenciamento gênico pós-transcricional (SGPT) ou
knockdown para o mRNA dessa proteína. Inicialmente, foi desenvolvido um protocolo
de transfecção utilizando o complexo de transfecção (CT) Lipofectamine® (volumes:
0,5; 0,75 ou 1,0 μl) + o oligonucleotídio fluorescente BLOCK-iT™ (concentrações:
18,03; 27,12 ou 36,16 nM), por diferemtes tempos de incubação (12, 14, 16, 18 or 20
h). Os resultados mostraram que as melhores condições de transfecção foram 0,75 μl de
Lipofectamine® + 27,12 nM de BLOCK-iT™ incubando-se por 12 h. O knockdown da
AQP3 foi realizado substituindo o BLOCK-iT™ pelo siRNA-AQP3 no CT. Folículos
secundários foram distribuídos aleatoriamente em grupos: Controle não-transfectados
(CD3 e CD6), transfectados com siRNA inespecífico (Negative Control Transfection -
tNEG) ou com siRNA-AQP3 nos dias 0 (t0D3 ou t0D6), 3 (t3D6) ou 0 e 3 (t0/3D6) e então
cultivados in vitro por 3 ou 6 dias. Após o cultivo, os folículos foram submetidos às
avaliações: expressão gênica e proteica, integridade e extrusão e ainda o
desenvolvimento folicular (crescimento, diâmetro e formação da cavidade antral). A
AQP3 foi imunolocalizada em todas as estruturas foliculares, embora a expressão
gênica em folículos transfectados e cultivados tenha sido menor que a de folículos
antrais obtido in vivo. As taxas de folículos íntegros (t3D6 e t0/3D6) e formação de antro
(t0/3D6) foram maiores em folículos transfectados do que a de folículos não
transfectados. A taxa de folículos extrusos foi maior nos tratamentos CD6 e t0D6,
enquanto que o tratamento t3D6 apresentou maior taxa de crescimento diário. Além
disso, folículos dos tratamentos transfectados t3D6 e t0/3D6 apresentaram maior
velocidade de crescimento folicular. Em conclusão, esse trabalho mostrou que é
possível transfectar com sucesso, folículos secundários ovinos usando a técnica de
siRNA e que essa técnica reduz a taxa de formação do antro em folículos secundários
cultivados in vitro. Essa é maius uma evidência de que a AQP3 tem participação na
formação da cavidade antral.