O congelamento de sêmen tem como intuito disseminar genética de animais melhoradores preservando a viabilidade espermática, garantindo a longevidade necessária para a utilização das amostras de sêmen em programas de reprodução animal. Objetivou-se avaliar o efeito da adição de glutationa, em diluentes de criopreservação a base de soja e gema de ovo, bem como diferentes técnicas de congelamento, sendo máquina e geladeira, sobre a qualidade do sêmen pós-descongelamento. Foram congelados 5 ejaculados de 4 touros da Raça Holandesa, totalizando 20 amostras. Após as colheitas os ejaculados foram colocados em tubos sendo 0,5 ml de sêmen e 9,5 ml de diluidor, posteriormente a diluição foi adicionado a glutationa nas concentrações de 1,5 e 2,5 mM. Após diluídas e homogeneizadas as amostras foram envasadas em palheitas de 0,5 ml. As amostras foram congeladas de acordo com os seguintes tratamentos, AndroMed® controle - diluente sem adição de glutationa congelado em geladeira e máquina, AndroMed® 1,5 mM de glutationa - diluente com adição de glutationa congelado em geladeira e máquina, AndroMed® 2,5 mM de glutationa - diluente com adição de glutationa congelado em geladeira e máquina, BotuBov® controle - diluente sem adição de glutationa, congelado em geladeira e máquina, BotuBov® 1,5 mM de glutationa - diluente com adição de glutationa congelado em geladeira e máquina e BotuBov® 2,5 mM de glutationa - diluente com adição de glutationa congelado em geladeira e máquina. O Experimento foi conduzido em delineamento em blocos em esquema fatorial em 2x3x2, considerando o touro com bloco. Os dados gerados foram analisados no programa R Project for Statistical Computing pelo teste t a 5% de probabilidade, através do R Project versão 3.2.2 (R, 2015). As variáveis avaliadas foram motilidade total e progressiva, vigor e integridade de membrana plasmática. A adição de glutationa não alterou estatisticamente a motilidade total, motilidade progressiva e vigor, em nenhuma das concentrações utilizadas. Nas análises de integridade de membrana plasmática houve diferença estatística quanto ao uso dos diluidores, o diluidor a base de gema de ovo obteve resultados superiores independente da forma de congelamento ou adição de glutationa.