Os carrapatos são importantes vetores de doenças para o homem e outros animais
vertebrados. O Rhipicephalus (Boophilus) microplus é um ectoparasito exclusivo de
bovinos, sendo responsável pela transmissão de infecções causadas por ricketsia,
Anaplasma sp, Babesia sp. O R. microplus causa grandes prejuízos à pecuária devido a
perdas consideráveis na produção de carne, couro e leite. No Brasil esse prejuízo
alcançam dois bilhões de dólares. Algumas proteínas como, por exemplo, enzimas e
inibidores proteicos já foram identificados e caracterizados na saliva, entretanto pouco
se sabe a respeito das proteínas identificadas no intestino do carrapato. Recentemente,
foi realizado um transcriptoma de intestino de R. microplus no nosso laboratório, dentre
os genes encontrados foi identificado um inibidor de cisteínoproteases da família das
cistatinas. Neste trabalho, o inibidor foi nomeado Rmcistatina-4 e sua expressão gênica
avaliada em diferentes tecidos do carrapato, onde foi possível determinar sua
localização específica no intestino. O gene de Rmcistatina-4 apresenta uma fase de
leitura aberta de 390 pares de bases, que codificam 129 aminoácidos, massa molecular e
ponto isoelétrico teóricos de 14,2 kDa e 6,87, respectivamente. Rmcistatina-4
apresentam quatro resíduos de cisteína provavelmente responsáveis por duas pontes
dissulfeto, um peptídeo sinal e os motivos conservados de cistatinas preditos (G),
(QxVxG) e (P\V) A Rmcistatina-4 recombinante foi expressa em levedura, a proteína
purificada apresentou inibição para as seguintes, papaína, seguida de BmCl-l, catepsina
B e catepsina L com valores de Ki = 4,08 nM; 9,93 nM; 92,8 nM e 897 nM,
respectivamente. O inibidor Rmcistatina-4 inibiu a enzima BmCL-l, sugerindo ser um
dos controladores fisiológico desta enzima, pois ambos estão co-localizados no intestino
do carrapato. Neste trabalho, também foi sub-clonado o inibidor Bmcistatina-I (Lima et
ai 2006) e a proteína recombinante foi utilizada para a realização dos experimentos de
cristalização, nos quais foram obtidos micro cristais, no entanto os mesmos não foram