A amônia é um composto tóxico para os organismos aquáticos e em elevadas concentrações na água pode causar diversas alterações no animal. Dessa forma, torna-se importante determinar o limite de tolerância dos animais aquáticos cultivados à essa substância. Sendo assim, o objetivo do trabalho foi determinar a concentração letal média (CL50-96h) da amônia não ionizada (NH3) em alevinos de tambacu (Colossoma macropomum x Piaractus mesopotamicus), em teste de toxicidade aguda e avaliar os efeitos de concentrações subletais através da análise de parâmetros hematólogicos. No teste de toxicidade aguda, os alevinos foram expostos à amônia, nas concentrações de: 0,09 (controle); 0,54; 1,23; 2,52; 3,44 e 3,66 mg L-1 NH3, que foram obtidas a partir da aplicação de NH4Cl. O teste teve duração de 96h e as mortalidades foram registradas ao longo desse período. A CL50 foi determinada pelo método estatístico Trimmed Spearman Karber. No teste de exposição subletal à amônia, utilizou-se as concentrações: 0,04 (controle), 0,19 e 0,35 mg L-1 NH3. Para análise dos parâmetros hematológicos, foram realizadas coletas de sangue antes da adição de NH4Cl (tempo zero) e após 96h de exposição. Os parâmetros hematológicos analisados foram: hematócrito (Ht), taxa de hemoglobina (Hb), número de eritrócitos (RBC), volume corpuscular médio (VCM), hemoglobina corpuscular média (HCM) e concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM). Os dados dos parâmetros hematológicos foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e quando houve diferença significativa entre os tratamentos, as médias foram comparadas duas a duas através do teste de Tukey (α= 0,05). A CL50-96h da amônia não ionizada (NH3) para alevinos do híbrido tambacu foi 1,63 mg L-1. Após exposição de 96h a 0,35 mg L-1 NH3, os peixes apresentaram reduções significativas no Ht e VCM e aumento significativo na CHCM. Já Hb, RBC e HCM não diferiram significativamente entre os tratamentos e o tempo 0. A exposição de alevinos de tambacu por curto período de tempo a 0,19 mg L-1 de amônia não ionizada (NH3) não causa alterações significativas nos parâmetros hematológicos desses peixes.