Clostridium perfringens é um bacilo Gram-positivo, formador de esporo e produtor de
ao menos 17 toxinas, das quais, quatro são consideradas principais, a toxina alfa
(CPA), beta (CPB), épsilon (ETX) e iota (CPI) utilizadas para classificar a espécie em
cinco toxinotipos (A, B, C, D e E). A toxinfecção nos animais ocorre por via
iatrogênica/traumática ou gastrointestinal. As principais enfermidades causadas por
C. perfringens são gangrena gasosa, enterotoxemias, enterite necrótica/hemorrágica
e enterocolite. As vacinas contra as toxinas de C. perfringens são extensivamente
utilizadas em medicina veterinária, tornando-se a principal medida de controle e
profilaxia nos rebanhos. Tem crescido o número de estudos visando à utilização de
vacinas recombinantes contra as principais toxinas de C. perfringens (CPA, CPB e
ETX). Com isso, o objetivo do presente estudo foi avaliar os títulos de anticorpos
neutralizantes antitoxinas CPA, CPB e ETX em coelhos vacinados com células
inteiras inativadas de Escherichia coli (bacterinas recombinantes), assim como, a
fração celular solúvel ou insolúvel, contendo tais antígenos. Após a expressão das
proteínas, as células foram inativadas com formaldeído na concentração final 0,2%
(v/v). Em seguida, a eficiência da inativação foi avaliada por plaqueamento de uma
alíquota do cultivo em placas de LB ágar. Confirmada a inativação, as bactérias
foram centrifugadas e lavadas com PBS estéril para remoção de formaldeído
residual. Nas vacinas compostas por frações celulares solúveis e insolúveis, a
presença dos antígenos rCPA, rCPB e rETX foi confirmada através de SDS-PAGE e
western blot. As proteínas, nas duas formulações, foram quantificadas por SDSPAGE
juntamente com uma curva com diferentes concentrações de albumina sérica
bovina (BSA) e analisadas no software TotalLab quant®. As características de
solubilidade dos antígenos recombinantes foram idênticas em ambos os vetores
utilizados, pAE e pET28a, onde rCPA e rCPB foram expressas em corpos de
inclusão e rETX na forma solúvel. Não foram detectados títulos de anticorpos
neutralizantes antitoxinas CPA, CPB ou ETX no soro dos animais vacinados com
ambas as formulações vacinais contendo 50 µg de cada antígeno expresso no vetor
pAE. Entretanto, no segundo experimento com 200 µg de cada antígeno expresso
em vetor pET28a, em ambas as formulações, geraram títulos de anticorpos
neutralizantes antitoxina ETX de 10 UI/mL-1
, cinco vezes superior ao valor mínimo
preconizado pelo Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA). Não
foram detectados títulos de anticorpos neutralizantes antitoxina CPB. A titulação de
anticorpos neutralizantes antitoxina CPA não foi realizada. Os resultados do
presente estudo, não apenas sustentam a potencial utilização de antígenos
recombinantes, mas também fornecem dados adicionais quanto à vacinação com
células inteiras inativadas de E. coli ou fração celular solúvel e insolúvel contendo
proteínas recombinantes. Essa forma alternativa de produção de vacinas
recombinantes visa à disponibilização de antígenos de alta qualidade e baixo custo
para utilização pela indústria veterinária