O objetivo do estudo foi realizar o levantamento da micoplasmose em poedeiras comerciais na região sudeste do Brasil, caracterização genética de isolados e relacionar essa infecção à qualidade de ovos comerciais. Em todas as granjas estudadas houve a detecção de MS pela PCR e elevada prevalência nos lotes estudados, com 93,3% (14/15) de positividade. Na análise individual, 50,7% das galinhas foram positivas para MS (38/75). À PCR, 1,3% de positividade (1/75) e, ao isolamento, Mycoplasma gallisepticum (MG) foi encontrado em 10,7% (8/75) das galinhas e 36,4% (4/11) das granjas. Dos oito isolados de MG, dois foram identificados como cepas de campo e seis como cepas vacinais pela análise filogenética. Ao analisar os resultados de prevalência de EAA em ovos comerciais, observou-se uma média total de 0,80% dos ovos com a anormalidade, variando de 0,17% a 2,48%. Comparações entre as médias dos parâmetros de qualidade de todos os ovos normais e aqueles com EAA estudados revelaram diferença significativa em quase todos os parâmetros, com exceção da cor da gema. Dentre os parâmetros de qualidade estudados, aquele que mais sofreu influência da EAA foi a força da casca, que teve uma redução média de 23,1%. Foi possível determinar a alta ocorrência de MS pela PCR e pelo ELISA nos plantéis de poedeiras comerciais, assim como detectar MG pelo isolamento e diferenciar as cepas vacinais daquelas de campo, além de identificar isolados de Mycoplasma gallinaceum e M. pullorum pelo sequenciamento. A ocorrência de MS e a detecção de ovos com EAA nos plantéis de postura comercial na região sudeste do Brasil, sugerem a ocorrência disseminada desta infecção e da lesão nos ovos de plantéis de poedeiras comerciais no sudeste do Brasil, região de maior volume de produção de ovos. Ficou demonstrado que a EAA afeta não só o ápice da casca do ovo, mas também os demais parâmetros de qualidade externa e interna. O sequenciamento da região intergênica 16S-23S rDNA se mostrou uma boa alternativa para a identificação de espécies de micoplasmas isoladas de amostras de campo, com resultados rápidos e confiáveis, a custo relativamente baixo e para tipagem pela sequência de um único locus (single-locus sequence typing – SLST) de isolados de MG.