O anetol, devido às suas propriedades anti-espasmódica, anti-inflamatória e
anti-oxidante, é um candidato promissor para o tratamento de doenças respiratórias.
No presente estudo, caracterizou-se o efeito do anetol sobre o acoplamento
eletromecânico de miócitos traqueais de rato, elucidando o mecanismo de ação nos
parâmetros cinéticos dos canais para cálcio operados por voltagem (VOCCs). Foram
utilizados ratos Wistar (150-250g) para estudar as respostas contráteis em
prepararações de anéis de traqueia em câmara de superfusão para órgão isolado.
Mudanças na tensão foram medidas isometricamente por um transdutor de força
conectado a um sistema de aquisição de dados computadorizado. Miócitos traqueais
foram dissociados por métodos enzimáticos e mecânicos e utilizados para investigar
correntes de Ca2+ (ICa) através da técnica de Patch-Clamp na modalidade whole-cell
voltage-clamp. Análises in silico foram feitas através de docking molecular. A ordem
crescente de eficácia farmacológica para o anetol e bloqueadores de receptores de
rianodina, Rho quinase e VOCCs, em reverter a contração evocada por 80 mM de
KCl, foi: rianodina (30%; N = 6) < y-27632 (60%; N = 5) < nifedipina (100%; N = 10) e
anetol (100%; N = 10). Observou-se que o run-down das ICa utilizando o Ba2+
estabilizou mais rapidamente do que quando se utilizou Ba2+ + Bay K 8644 (~4,75
min; N = 34 e ~8,4 min; N = 100, respectivamente). Cádmio (100 μM) e nifedipina
(10 μM) bloquearam 90,71 ± 2,20% (N = 7) e 97,02 ± 1,48%, respectivamente, das
ICa em relação ao controle. Os valores obtidos das curvas da relação correntevoltagem,
no controle e na presença de anetol, foram, para o pico de corrente de
influxo, - 3,58 ± 0,39 (N = 18) e - 1,53 ± 0,26 pA/pF (N = 18), respectivamente. Na
condição controle V1/2 = – 7,58 ± 1,39 mV e k = 7,82 ± 0,79 e na presença do anetol
V1/2 = 9,49 ± 4,42 mV e k = 14,14 ± 1,37. Na análise das curvas de estado
estacionário da ativação e da inativação dos VOCCs, os valores de V1/2 e k, em
condições controle e experimental, foram, respectivamente: V1/2 = – 6,46 ± 0,32 mV
e k = 8,38 ± 0,27; V1/2 = 1,41 ± 0,81 mV e k = 10,79 ± 0,65, para ativação, e V1/2 = –
25,38 ± 1,73 mV e k = - 12,52 ± 1,61; V1/2 = - 36,42 ± 3,20 mV e k = - 13,86 ± 2,79,
para inativação. Os valores das medianas e das médias, nos parâmetros tempo para
atingir o pico e tau de inativação, foram, respectivamente, em condições controle e
experimental: 13,50 e 10,40 ms; 133,45 ± 36,15 e 89,92 ± 50,83 ms. Na técnica de
docking molecular, foram encontrados prováveis sítios de ligação do anetol com
VOCC, RRi, RhoA e ROCK nas posições asparagina 390 (G = - 6,17), serina 727
(G = - 5,69), asparagina 41 (G = - 6,06), alanina 161 e lisina 118 (G = - 6,11),
respectivamente, apresentando, anetol com a ROCK, dois prováveis sítios. O anetol
relaxa o músculo liso traqueal de rato, muito provavelmente, por bloquear ICa,L.