o óxido nítrico (NO) é um radical livre relativamente estável que atua na regulação de diversos processos fisiológicos e fisiopatológicos. A produção de NO nas células se dá pelas isoformas das óxido nítrico sintases (NOS), sendo duas constitutivas - a neuronal (nNOS) e a endotelial (eNOS) - e uma induzível (iNOS). No câncer, os efeitos do NO dependem dos níveis de expressão das NOS, das concentrações intracelulares e extracelulares de NO no ambiente tumoral, do conteúdo genético das células, da sensibilidade celular e do tipo celular envolvido. A iNOS é codificada por um gene que apresenta 27 éxons e, além da forma completa desta enzima, já foram identificadas variantes de splicing alternativo em células de diversos tecidos humanos, em macrófagos alveolares e em linhagens celulares tumorais. Em relação ao câncer de mama, se trata de uma doença multifatorial e bastante heterogênea, classificada basicamente de acordo com a expressão dos receptores de estrógeno (ER) e de progesterona (PR) e do HER-2. Já se mostrou que alta expressão de iNOS está relacionada a uma menor taxa de sobrevivência em pacientes com tumores ER-negativos. Objetivos: Investigar a expressão da iNOS e de duas variantes de splicing alternativo (8- 9- e 9- 10- 1r) em linhagens celulares e em amostras clínicas de tumores de mama; correlacionar a expressão dessas com os subtipos tumorais e com a produção de NO. Métodos: Foram utilizadas duas linhagens celulares de tumores de mama: uma ERpositiva (MCF7) e uma ER-negativa (MDA-MB-231). Foi realizado o isolamento de células das amostras clínicas por meio de digestão enzimática seguida por centrifugação diferencial, obtendo-se células epiteliais e fibroblastos. Para todos os tipos celulares foi realizada a mensuração da produção intracelular de NO por citometria de fluxo e a quantificação da expressão da iNOS e suas variantes de splicing alternativo pela técnica de Southern blotting e por qPCR. Resultados: Tanto para as linhagens quanto para as células epiteliais e fibroblastos, foi verificado que as células ER-negativas apresentam maior produção de NO comparado às ER-positivas. A produção de NO nos fibroblastos está relacionada à intensidade do infiltrado inflamatório no sítio tumoral. Não houve correlação entre os níveis de expressão da iNOS e a produção de NO. As variantes de splicing alternativo puderam ser analisadas apenas pela técnica de Southern blotting, porém xviii < não foi verificada correlação entre a expressão delas e os subtipos tumorais. No entanto, a variante 3 (9- 10- 11-) se mostrou bastante evidente no tumor micropapilar. Conclusão: Tanto para as linhagens celulares quanto para as células primárias, ficou demonstrado que não há relação entre o perfil de expressão da iNOS, suas formas de splicing alternativo e os níveis de produção de NO. Essas observações reforçam a existência de um mecanismo de regulação bastante complexo da expressão da enzima. A forte expressão da variante 3 no tumorrnicropapilar mostra a necessidade da investigação da regulação da expressão da iNOS nesse tipo tumoral. Assim, o trabalho reforça a complexa regulação da iNOS e da consequente produção de NO por esta enzima nos tumores de mama. Dada a importância do NO na biologia dos tumores, uma maior investigação