O estado de Minas Gerais é famoso pelo seu queijo artesanal (QMA) produzido a partir de leite cru e inoculado com soro fermento endógeno, também conhecido como “pingo”. Em virtude de sua produção artesanal, esse queijo é rico em bactérias do ácido lático (BAL), provenientes de diferentes origens como soro fermento, silagem, água e leite, podendo manifestar potencial probiótico. O objetivo desse presente trabalho foi identificar molecularmente Lactobacillus spp., e Pediococcus acidilactici isolados de silagem, água, leite, soro fermento e QMA fresco (0 dias) e maturado (7, 14,21,28 e 60 dias), de sete queijarias e verificar suas origens por meio de relações filogenéticas entre as amostras, bem como caracterizar seu potencial probiótico in vitro e in vivo. Noventa e quatro amostras Gram positivo e catalase negativo foram submetidas à reação de rDNA 16S-23S, sendo posteriormente selecionadas trinta e seis amostras como sendo pertencentes ao gênero Lactobacillus/Pediococcus. O sequenciamento do gene rRNA 16S identificou cinco espécies: Lactobacillus plantarum, L. paracasei, L. brevis, L. rhamnosus e Pediococcus acidilactici. A reação de fingerprinting via rep-PCR (GTG)5 permitiu a montagem de um dendrograma via UPGMA e mostrou predominância de Lactobacillus plantarum (75,7%)em todas as origens pesquisadas, seguido de L. brevis (9,1%), L. paracasei (6,1%), P. acidilactici (6,1%) e L. rhamnosus (3,0%). Essas amostras foram submetidas aos testes in vitro, sendo seleciondas quanto ao seu potencial probiótico com base na resistência aos sais biliares, resistência aos ácidos em pH 2.0 e pH 1.5. Um total de oito amostras foram selecionadas por meio destes testes, sendo posteriormente submetidas à avaliação de susceptibilidade aos antimicrobianos e antagonismo frente a microrganismos patogênicos. Duas amostras (Lactobacillus plantarum LP4 e Pediococcus acidilactici PA2) foram selecionadas para os testes in vivo por apresentarem bons percentuais de resistência aos sais biliares e ácidos, baixos percentuais de resistência aos antimicrobianos e antagonizar a ação de microrganismos patogênicos. Os resultados de mortalidade e desenvolvimento ponderal de camundongos desafiados com Salmonella enterica sorovar Typhimurium e associados ou não à administração oral de LP4 e PA2 exibiram baixo efeito protetor por parte das duas amostras, embora LP4 tenha apresentado desenvolvimento ponderal superior (p<0,05) aos controles negativo e positivo (uma amostra comercial de Lactobacillus casei). Esses resultados indicam que a amostra L. plantarum LP4 poderia ser mais explorada em futuras pesquisas referentes ao uso desse microrganismo quanto ao seu potencial probiótico.