O processo in vivo de fertilização ocorre na presença de fluido folicular (FF), um líquido
derivado do plasma sanguíneo com composição dinâmica. Esse fluido está envolvido nos
processos de crescimento e maturação do oócito, bem como na capacitação do
espermatozoide. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação do meio
de fertilização com 5% ou 10% de fluido folicular bovino (FFB) na produção de embriões
in vitro e na expressão de genes marcadores de qualidade embrionária (OCT4, IFNT2,
SOD2, HSP70 e BAX). Para isso, o FF foi coletado de folículos ovarianos com um
diâmetro de 8 mm a 10 mm. Após a aspiração, o FF foi depositado em tubos de 15 mL e
submetido a centrifugações (600 g) por 25 minutos, seguido de filtração e armazenamento
a -20ºC. Complexos cumulus oophorus (COCs) obtidos de um abatedouro local foram
selecionados e maturados in vitro por 20 horas. Para a fertilização, os COCs foram coincubados com espermatozoides por 24 horas no meio comercial BotuFIV® SOF-FIV
(BotuPharma©), sendo aleatoriamente distribuídos entre os grupos experimentais: Grupo
Controle (sem adição de FFB); Grupo FFB 5% (suplementado com 5% de FFB) e Grupo
FFB 10% (suplementado com 10% de FFB). Após a fertilização, os presumidos zigotos
foram transferidos para o meio Synthetic Oviductal Fluid e cultivados in vitro por 8 dias.
O desenvolvimento dos embriões foi avaliado através das taxas de clivagem (dia 2) e
formação de blastocistos, morfologia, cinética de desenvolvimento e contagem do
número de células (dia 8). Os embriões obtidos no 8º dia foram utilizados em PCR em
tempo real (três réplicas com um pool de cinco embriões cada) para analisar a expressão
de genes relacionados à qualidade embrionária (OCT4, IFNT2, BAX, HSP70 e SOD2). Os
experimentos foram realizados com um total de 841 COCs e a análise estatística foi feita
usando o software SigmaPlot 14.0 (Systat Software Inc.), com os dados passando por
análises de variância (one-way ANOVA). Todos os resultados são apresentados como
média ± desvio padrão. O nível de significância considerado em todas as análises foi de
5%. Não houve diferença (p>0,05) entre os diferentes grupos experimentais em relação
as taxas de clivagem, taxas de formação de blastocistos, cinética embrionária e número
de células dos embriões produzidos. Em relação aos resultados da PCR, apenas o Grupo
FFB 10% apresentou uma expressão significativamente menor dos genes IFNT2 (P =
0,003) e SOD2 (P = 0,01) em comparação com o Grupo Controle, enquanto não houve
diferença entre o Grupo Controle e o Grupo FFB 5%. Este resultado pode ser devido a
uma concentração muito alta de metabolitos proveniente do FFB no meio de FFB 10%.
Além deste resultado, o Grupo FFB 5% apresentou níveis significativamente diminuídos
de expressão da proteína de choque térmico HSP70 (P < 0,001) e da proteína próapoptótica BAX (P = 0,015) em comparação com o Grupo Controle, sem apresentar
diferenças nos genes OCT4, IFNT2 e SOD2. Isto pode ser um indicador de que a
suplementação de uma pequena quantidade de FFB ao meio de FIV gera um ambiente
mais adequado para a fecundação e menos estressante para o zigoto