Em galinhas de pequenas propriedades, espera-se que o nível de diversidade genética seja alto, devido aos diversos cruzamentos realizados desde a época da introdução das mesmas aqui no Brasil. Com isso, a pesquisa tem como objetivo identificar se há diversidade genética de galinhas Gallus gallus domesticus da sub-região Meio-Norte do Brasil, através de marcadores moleculares do tipo microssatélite. Foram coletadas amostras de sangue de 37 aves, em FTA (Flinders Technology Associates) cards. As aves eram oriundas de duas microrregiões do estado do Maranhão (Itapecuru-Mirim, 11 aves e Chapadinha, 13 aves) e uma microrregião do Piauí (Paulistana, 6 aves), e aves Canela-Preta (7 aves) de Teresina. O DNA extraído a partir dos FTA cards foi amplificado em PCR e genotipado em sequenciador. Os 15 primers ISAG/FAO selecionados para o estudo amplificaram com sucesso, mostrando 84 alelos distintos na genotipagem das 37 aves. O valor médio de heterozigosidade esperada (He) foi de 0,726, e o valor médio de heterozigosidade observada em todos os indivíduos foi de 0,681. A riqueza alélica (AR) média em todo o plantel foi de 6,281, seguido de média de 0,673 para o Conteúdo de Informação Polimórfica (PIC). O grupo 1 (Brejo/Itapecuru) obteve o maior número de marcadores (LEI0216, MCW0037, LEI0192 e LEI0094) que apresentaram desequilíbrio de Hard-Weinberg e todos eles apresentaram déficit de heterozigotos. O (Fst) apresentou média de 0,0266, o que é considerado baixo, e, portanto, não foi possível verificar a existência de diferenciação genética entre os grupos. Conclui-se que os marcadores utilizados foram informativos para o estudo de diversidade genética. As aves do Núcleo da Embrapa Meio-Norte, apesar dos testes estatísticos não terem detectado diferença entre os grupos, demonstraram ter diversidade genética, com base nos índices de He, Ho e PIC. Por se tratar de uma caracterização genética, essa pesquisa é de extrema importância, para que ações de manejo genético sejam realizadas, além de futuras pesquisas que oportunizem a conservação dos recursos genéticos.