Resumo:
O vírus da cinomose canina (CDV) é um dos principais agentes infecciosos de cães domésticos
e carnívoros silvestres, causando uma doença infecciosa multissistêmicas de alta mortalidade
que acomete animais de diferentes faixas etárias, raças, machos e fêmeas e, tanto vacinados
quanto não vacinados. A vacinação é o principal método de controle desta doença, no entanto,
estudos vêm mostrando a possível existência de falhas vacinais em decorrência de diferença
genética entre estirpes circulantes e estirpes vacinais. Dados referentes à epizootiologia são
desconhecidos em Goiânia, poucos estudos comparam métodos diagnósticos em diferentes
amostras em uma população de cães sintomáticos e às características moleculares do CDV em
Goiás ainda não foram documentados. Este estudo objetivou determinar as características
epizootiológicas do CDV, comparar os métodos diagnósticos de imunocromatografia (IC) e
RT-PCR para a identificação do agente etiológico em diferentes amostras biológicas [swab
conjuntival, sangue, urina, fluido cerebroespinal (FCE) e pool de amostras] e identificar as
estirpes do CDV circulantes em cães naturalmente infectados e sintomáticos, no município de
Goiânia, GO, Brasil, durante os anos de 2017 e 2020. Dados epizootiológicos foram coletados
de 74 cães com sinais clínicos extraneurais e/ou neurais compatíveis com cinomose. Destes
cães, 46 (62%) foram positivos por meio do teste de imunocromatografia (31%) ou pela técnica
de RT-PCR (53%). Cães machos e fêmeas, de diferentes raças e idades foram acometidos, mas
houve predominância em cães sem raça definida, adultos de um a seis anos e não vacinados.
No entanto, aproximadamente 10,9% dos cães infectados e sintomáticos eram vacinados. Os
sinais extraneurais predominantes foram hiporexia ou anorexia, secreção nasal e/ou ocular,
desidratação e hiperqueratose de coxins e trufa. Dentre os sinais clínicos neurais os mais
frequentes foram alteração de estado mental, déficit motor e mioclonias. Foi observada
letalidade de aproximadamente 89% entre os animais com acometimento neurológico. As
amostras de swab conjuntival, urina, pool e FCE tiveram maior frequência de positividade no
teste de IC enquanto as amostras de urina e sangue, na RT-PCR. Do total de 149 amostras
(sangue, urina e FCE) destinadas ao RT-PCR (gene N), o vírus foi identificado em 64 amostras
(42,95%) e foram selecionadas 54 positivas para a RT-PCR seguida por Nested PCR para
amplificação parcial do gene hemaglutinina (H). A amplificação parcial do gene H foi realizada
e oito amostras foram sequenciadas e caracterizadas por meio da análise filogenética como
pertencentes ao genótipo América do Sul 1/ Europa. Foram encontrados diferentes locais de
substituição de aminoácidos no fragmento do gene H analisado das sequências identificadas e
uma estirpe apresentou a mutação Y549H, típica de animais silvestres. Outros locais do
fragmento apresentaram substituições em epítopos (resíduos 367, 376, 379, 381, 386 e 388) que
podem interferir com a habilidade da vacina em promover proteção adequada contra a infecção
pelo CDV, reduzindo sua efetividade. As estirpes isoladas foram geneticamente distante das
estirpes vacinais, pertencentes ao genótipo América do Norte 1, com aproximadamente 10% de
diferença nucleotídica. A partir da análise do genótipo América do Sul 1/ Europa, foram
definidos dez subgenótipos. Esses achados evidenciam a relevância da infecção de cães por
cinomose no Brasil, demonstrando a predominância do genótipo América do Sul 1/ Europa na
região central do país e suportam a necessidade da realização de estudos epizootiológicos e de
identificação molecular do CDV em outras regiões do país, em decorrência de sua grande
extensão geográfica, da variabilidade de espécies animais acometidas, das diferenças
moleculares entre as estirpes e da alta taxa de letalidade entre os animais infectados
sintomáticos.
Abstract:
The canine distemper virus (CDV) is one of the main infectious agents of domestic dogs and
wild carnivores, causing a multisystemic infectious disease with high mortality that affects
animals of different age groups, breeds, males and females, and both vaccinated and
unvaccinated. Vaccination is the main method of controlling this disease, however, studies have
shown the possible existence of vaccine failures due to a genetic difference between circulating
strains and vaccine strains. Data regarding epizootiology are unknown in Goiânia, few studies
compare diagnostic methods in different samples in a population of symptomatic dogs and the
molecular characteristics of CDV in Goiás have not yet been documented. This study aimed to
determine the epizootiological characteristics of CDV, compare the diagnostic methods of
immunochromatography (IC) and RT-PCR for the identification of the etiological agent in
different biological samples [conjunctival swab, blood, urine, cerebrospinal fluid (CSF), and
sample pool] and identify the circulating CDV strains in naturally infected and symptomatic
dogs in the municipality of Goiânia, GO, Brazil, during 2017 and 2020. Epizootiological data
were collected from 74 dogs with extraneural and/or neural clinical signs compatible with
distemper. Of these dogs, 46 (62%) were positive using the immunochromatography test (31%)
or by the RT-PCR technique (53%). Male and female dogs of different breeds and ages were
affected, but there was a predominance in mixed breed dogs, adults aged one to six years and
not vaccinated. However, approximately 10.9% of infected and symptomatic dogs were
vaccinated. Predominant extraneural signs were hyporexia or anorexia, nasal and/or ocular
discharge, dehydration, and nasal and digital hyperkeratosis. Among the neural clinical signs,
the most frequent were changes in mental status, motor deficit, and myoclonus. A mortality rate
of approximately 89% was observed among animals with neurological involvement.
Conjunctival swab, urine, pool, and CSF samples had a higher frequency of positivity in the CI
test, while urine and blood samples in RT-PCR. From a total of 149 samples (blood, urine, and
FCE) destined for RT-PCR (N gene), the virus was identified in 64 samples (42.95%) and 54
positives were selected for RT-PCR followed by Nested PCR for partial amplification of the
hemagglutinin (H) gene. Partial amplification of the H gene was performed and eight samples
were sequenced and characterized by phylogenetic analysis as belonging to the South America
1/Europe genotype. Different amino acid substitution sites were found in the analyzed H gene
fragment of the identified sequences and one strain presented the Y549H mutation, typical of
wild animals. Other fragment sites had epitope substitutions (residues 367, 376, 379, 381, 386,
and 388) that may interfere with the vaccine's ability to provide adequate protection against
CDV infection, reducing its effectiveness. The isolated strains were genetically distant from the
vaccine strains, belonging to the North America 1 genotype, with approximately 10%
nucleotide difference. From the analysis of the South America 1/ Europe genotype, ten
subgenotypes were defined. These findings highlight the relevance of canine distemper
infection in Brazil, demonstrating the predominance of the South America 1/ Europe genotype
in the central region of the country and support the need to conduct epizootiological and
molecular identification studies of CDV in other regions of the country, due to its large
geographic extension, the variability of animal species affected, the molecular differences
between the strains and the high lethality rate among symptomatic infected animals.