A sexagem fetal em equinos representa uma abordagem de grande importância para a equideocultura. Através da determinação do sexo do feto, tomadas de decisões por parte do produtor podem ser realizadas quanto ao concepto, como, a manutenção do potro no plantel, venda e determinação do valor da venda, utilização para determinada atividade, entre outros. Algumas técnicas já são utilizadas com essa finalidade, como ultrassonografia, aplicações moleculares, bioquímicas e citogenéticas, porém, o longo tempo empregado nas técnicas, a necessidade de mão-de-obra treinada, e a utilização de equipamentos laboratoriais caros, oneram e restringem a sua realização. O objetivo deste trabalho é desenvolver um protocolo baseado na técnica de LAMP (Amplificação Isoretmal Mediada por Loop) para sexagem de equinos que possa ser aplicada para a sexagem fetal utilizando o DNA circulante no sangue materno. Para isso, foram realizados estudos para a identificação de genes macho específicos, que foram determinantes para o desenvolvimento do trabalho in silico, com desenhos e análise de primers e na otimização das técnicas da Reação em cadeia da Polimerase (PCR) e LAMP. Foi coletado sangue de 10 cavalos e 10 éguas e realizada ainda a quantificação e diluição do DNA obtido para a determinação da quantidade mínima de DNA necessário para obtenção de resultados esperados. Através dessa quantificação a menor concentração adotada para a otimização da etapa colorimétrica na técnica de LAMP foi de 0,004 ng/μL de DNA. Após a otimização, foi coletado sangue venoso de 13 éguas prenhas, nos tempos de 30, 60, 90 dias de gestação, e, através da extração de DNA do plasma sanguíneo, foi realizado o teste de diagnóstico do sexo dos fetos por LAMP. Como resultados das otimizações da PCR e LAMP foi verificado que é possível diagnosticar o sexo dos equinos através dos genes escolhidos. No entanto, não se obteve resultado quanto a sexagem fetal utilizando o sangue materno até os 90 dias de gestação. Assim, considera-se a necessidade de realização de testes de diagnóstico fetal com a ampliação do período de coleta do sangue materno, quanto a idade gestacional das éguas, no terço médio e final da gestação.