O objetivo do presente estudo foi avaliar se a suplementação do meio de criopreservação com antioxidantes promoveria melhorias na qualidade seminal após o processo de congelação e descongelação do sêmen de bovinos pantaneiros. Foram utilizados 5 touros do grupamento genético pantaneiros (Bos taurus) em idade reprodutiva. A coleta de sêmen foi realizada por eletroestimulação e as amostras foram imediatamente avaliadas quanto à motilidade e vigor espermático, integridade e funcionalidade das membranas plasmática e acrossomal. Após avaliação, cada amostra seminal foi dividida em quatro alíquotas. Cada alíquota foi diluída em um dos quatro tratamentos descritos a seguir: Controle: meio comercial Triladyl® (MB) sem suplementação; TE: MB + 0,25 mM de Trolox®; TC: MB + 0,18 mM/mL de ácido ascórbico; TEC: MB + 0,25 mM de Trolox® e 0,18 mM/mL de ácido. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL (20x106 espermatozoide viáveis/palheta), resfriadas, congeladas e armazenadas em nitrogênio líquido até análise. Após descongelação, o sêmen foi submetido à análise computadorizada da cinética espermática (CASA), atividade citoquímica mitocondrial (DAB), análise de integridade de membrana plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial, fragmentação do DNA e status oxidativo. O experimento foi realizado em delineamento inteiramente casualizado sendo os dados analisados pelo programa SAS 9.3, as médias analisadas com nível de significância de 5%. O controle apresentou maior percentual de células móveis em relação aos tratamentos suplementados com ácido ascórbico, porém não diferiu do tratamento suplementado somente com Trolox (TE) (35,12 ± 2,76 e 28,25 ± 2,67; p=0,0043), respectivamente. Ambos os grupos também apresentaram maiores concentrações de células com alta atividade mitocondrial (DABI) (68,64 ± 5,33 e 70,75 ± 5,10; p=0,0001). A integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial, fragmentação do DNA e status oxidativo não diferiram entre os grupos. Sendo assim, concluiu-se que a suplementação do meio de criopreservação com Trolox® e ácido ascórbico individualmente ou em associação na dosagem de 0,25 mM e 0,18 mM/mL respectivamente, foram ineficientes na redução de danos causados pela criopreservação em sêmen de bovinos pantaneiros.