Leishmania (Viannia) braziliensis é a principal causa da leishmaniose
tegumentar americana (LTA) no Brasil. L. (V.) braziliensis causa três formas de
leishmaniose na Bahia: cutânea localizada (LC), leishmaniose mucosa (LM) e
leishmaniose disseminada (LD). Como passo inicial para a melhor
compreensão dos eventos parasita-hospedeiro que podem ajudar a determinar
o desfecho da infecção, avaliamos o padrão de expressão gênica global em
macrófagos derivados de monócitos (MDM) de voluntários saudáveis
infectados com parasitas isolados das três formas clinicas de LTA. Uma
multiplicidade de infecção de 2 parasitas por MDM foi usada. A análise de
microarranjo de DNA utilizou o RNA total proveniente dos MDM no ponto de 4h
de infecção. Nesse ponto de tempo, aproximadamente 80% dos MDM em
cultura foram infectados, com uma média de cinco parasitas por célula
hospedeira. Mais de 500 genes do hospedeiro, pertencentes a diferentes
grupos funcionais, apresentou mudanças significativas em seu comportamento,
onde a grande maioria se mostrou reprimido nos MDM infectados. Para validar
os achados gerais e estender as análises a pontos de tempo posteriores,
realizamos uma avaliação cinética (30 min, 4, 24 e 48 horas pós-infecção),
utilizando duas cepas do parasita. Avaliou-se a expressão por PCR em tempo
real de 21 transcritos, representando as diversas classes de genes afetados no
estudo inicial. Os níveis de infecção dos MDM permaneceram estáveis ao
longo da avaliação cinética. Aproximadamente 80% dos MDM foram infectados
nas culturas, no entanto, o número de parasitas por MDM aumentou
constantemente desde cerca de 5 no ponto de tempo de 4 horas a cerca de 20
parasitas por célula. Em relação a expressão gênica, às 4h os níveis dos 21
transcritos avaliados na validação foram semelhantes aos do estudo original.
Durante pontos de tempo posteriores, no entanto, parte dos transcritos
mantiveram níveis semelhantes aos de 4h, mas alguns apresentavam
alterações significativas nos seus comportamentos. Ao comparar os pontos de
4h contra 24h, oito do total de genes afetados (IL-10RB, MyD88H, PARK7,
TRERF1, UBC, NDUFA11, NUP214, NUP62) mostraram uma mudança
significativa nos seus níveis de expressão, indicando alterações significativas
para os seus níveis de transcritos ao longo do tempo de infecção. Na avaliação
cinética estendida até 48h pós-infecção encontramos mudanças significativas
em algum ponto em oito dos 21 genes. Entre estes seis genes são
semelhantes aos pontos de comparação entre 4 e 24 horas (IL-10RB, MyD88H,
PARK7, UBC, NDUFA11, NUP214), enquanto dois mostraram alterações
significativas após o ponto 24h (MT1M foi induzida e NUB1 foi reprimida)
correspondendo a funções importantes relacionadas com a resposta celular a
alterações ambientais. No seu conjunto, os dados indicam que, durante a
interação inicial entre L. (V.) braziliensis e o macrófago hospedeiro há uma
supressão geral dos principais processos na célula, o que pode ser importante
para o parasita estabelecer a infecção. No entanto a compreensão precisa da
relação hospedeiro-parasita requer uma avaliação completa, incluindo vários
pontos de tempo ao longo do processo infeccioso.