Os fatores de transcrição induzíveis por hipóxia HIF (Hypoxia-Inducible Factors,) compreendem um conjunto de complexos transcricionais multi-domínios que controlam as respostas homeostáticas e sistêmicas da célula em resposta à disponibilidade de oxigênio. Assim, estão intimamente ligados a desordens que levam à progressão de diferentes tipos tumorais. HIF é um heterodímero funcional composto pelas subunidades -β (HIF-1β), presente de forma estável, e -α (HIF-1α, -2α ou -3α, produzidas por genes parálogos), cuja estabilidade proteica é sensível aos níveis de oxigênio intracelular. Em tensões normais (~ 20% O2), modificações pós-traducionais, principalmente de hidroxilação na subunidade -α, levam à sua ubiquitinação e degradação pelo proteassomo. Em condições de hipóxia (< 3% O2), a subunidade -α é estabilizada e a subsequente formação do hétero-complexo HIF funcional promove a transcrição de genes associados, por exemplo, a formação de novos vasos sanguíneos e produção de eritrócitos, aumentando a disponibilidade de O2 e de nutrientes metabólicos. Enquanto que somente uma isoforma foi descrita para HIF-1α e HIF-2α, o mRNA transcrito pelo gene HIF3A é susceptível ao uso de diferentes promotores e à eventos de splicing, gerando pelo menos 9 isoformas de HIF-3α, das quais 3 já foram confirmadas como proteínas funcionais. Dessa maneira, o único domínio protéico comum à todas HIFs é o componente Per-Arnt-Sim C-terminal (PASb). PASb tem um papel sensorial reconhecidamente importante na detecção, formação e ativação do complexo heterodimérico HIF-1β:HIF-α. Recentemente, através de uma combinação de métodos experimentais de expressão heteróloga em sistemas bacterianos, biologia estrutural e biofísica in vitro, nosso grupo identificou que lipídeos compostos por ácidos graxos insaturados são potenciais e exclusivos ligantes não-covalentes de HIF-3α. Porém, a confirmação e a verdadeira natureza desses ligantes em células humanas, bem como as respectivas consequências dessa interação na estabilidade e regulação funcional do complexo HIF, permanecem elusivas. Este trabalho de mestrado se propôs a realizar a prospecção inicial dos ligantes endógenos equivalentes e definir o papel destes na regulação de genes alvos do fator de transcrição. Neste sentido, através da expressão transiente em Human embryonic kidney cells 293 (Hek293T) de HIF-3α selvagem e de uma variante mutante (Ala274Phe) incapaz na linhagem de se ligar a lipídeos, avaliamos, comparativamente, (i) a quantificação de expressão gênica, (ii) a capacidade de ativação de promotor canônico e produção de gene-repórter e (iii) por imunoprecipitação, seguida pela caracterização da fração apolar por espectrometria de massas, definimos os lipídeos associados a proteína selvagem. Coletivamente, estes experimentos sugerem que os lipídeos endógenos linolamida e eicosenamida, ambos da classe de ácidos graxos amida, têm a função de regular positivamente a função transcricional de HIF-3α em células-modelo, confirmando que ácidos graxos insaturados longos (> 16 carbonos) constituem o grupamento componente essencial para interação. Estes resultados deverão ser posteriormente validados em modelos celulares mais adequados, como linhagens de glioblastomas e neurogliamas, por exemplo, através de manipulação, em hipóxia, da via da Stearoyl-CoA desaturase (SCD-1) no retículo endoplasmático, e de Fatty-Acid-Binding Protein 5 (FABP-5), em células cultivadas na presença e ausência de lipídeos. Todos estes experimentos deverão ser acompanhados por estudos de transcriptoma. Nosso trabalho tem implicações importantes no entendimento da função de HIF-3α e futuro desenvolvimento de pequenas moléculas terapêuticas tendo como alvo específico esta subunidade.