O gênero Phaseolus é um dos 222 gêneros da Família Fabaceae, originário da Mesoamérica e tem o feijão-fava (Phaseolus lunatus L.) como sua segunda espécie mais estudada e de importância socioeconômica. O feijão-fava é uma espécie importante na agricultura de subsistência, nos ambientes tropicais úmidos da América, assim como, uma fonte de nutrientes para populações rurais na América do Sul e África, oferecendo oportunidades para o desenvolvimento de pequenos e médios produtores agrícolas. Além disso, essa espécie também é reconhecida como fonte de proteínas, carboidratos, ferro, cálcio, fibra da dieta básica humana, com baixo conteúdo de gorduras e com o potencial na prevenção de doenças cardiovasculares. No Brasil, a região Nordeste foi responsável por 99,17% do valor da produção no país, onde os genótipos utilizados por produtores são variedades crioulas, não havendo uso de variedades melhoradas, mesmo sendo necessário, pois há relatos de problemas relacionados à baixa produtividade havendo desuniformidade na maturação, susceptibilidade a pragas e doenças, entre outros. O presente trabalho objetivou caracterizar citogeneticamente 24 acessos de feijão-fava (P. lunatus L.) do Banco Ativo de Germoplasma de Phaseolus com características agronomicamente desejáveis, a fim de identificar os possíveis cruzamentos mais favoráveis com base na localização e mensuração da heterocromatina. Os acessos selecionados apresentaram as características: hábito de crescimento determinado, poucos dias para floração, elevado número de vagens por planta, elevado número de sementes por vagem, grande volume das sementes, alta produtividade, resistência à antracnose e à Macrophomina. Foram observados e mensurados os padrões de heterocromatina constitutiva como forma de diferenciação dos genótipos e ordenação de cruzamentos intraespecíficos dirigidos. O cariótipo se mostrou estável quanto ao número e tamanhos cromossômicos, porém houve variação no padrão de bandas e na proporção da heterocromatina constitutiva, variando de 21,1% a 38,77% do genoma total. Conclui-se que a técnica de dupla coloração com fluorocromos CMA e DAPI é eficaz na caracterização citológica de feijão-fava; a espécie exibe variação no padrão de heterocromatina constitutiva em diferentes genótipos; as informações providas têm importância para programas de melhoramento.