Objetivou-se avaliar os efeitos da suplementação da glicerina bruta (GB) a partir de óleo residuais de fritura sobre a riqueza e composição da comunidade bacteriana, consumo, cinética e parâmetros ruminais em ovinos deslanados. O experimento foi conduzido no Módulo Didático de Caprinovinocultura da Universidade Federal do Piauí, UFPI – CPCE. Foram utilizados quatro ovinos fistulados, com aproximadamente 54,5 ± 3,5 kg, dois anos de idade, distribuídos em um quadrado latino 4 × 4, cada período experimental foi constituído por 10 dias de adaptação e 5 dias de coleta de dados. Utilizou-se níveis crescentes de glicerina bruta de 0, 2,5, 5 e 7,5% da matéria seca (MS) do concentrado em substituição ao milho, em dietas isoproteicas, tendo como base volumosa o capim elefante (Pennisetum purpureum Schum), na proporção de 60%. Para a avaliação da eficácia do protocolo HotSHOT na extração de DNA genômico da microbiota bacteriana ruminal as amostras do líquido ruminal foram obtidas pela filtragem do conteúdo ruminal coletado na porção ventral do rúmen antes da alimentação matinal no 15º dia de cada período experimental. Para a extração do DNA bacteriano foi utilizado um protocolo modificado empregando-se o método HotSHOT, sendo a sua quantificação e pureza determinada pela a espectrofotometria. Foi constado que todos os pellet de DNA apresentavam a presença de contaminantes que não foram eliminados no processo de extração, no entanto, valores da pureza de DNA próximos a 1.5, conforme os obtidos no presente estudo, podem ser considerados satisfatórios para utilização em PCR. Após eletroforese em gel de agarose 1%, foi possível visualizar a presença de DNA genômico, fornecendo indícios da eficiência do protocolo de HotSHOT. Para determinar a degradabilidade do concentrado foi usada a técnica in situ, com sacos de TNT, contendo 0, 6,25, 12,50 e 18,75% de GB, sendo avaliados os tempos 0, 3, 6, 12, 18, 24, 48 e 72 horas de permanência no rúmen. Contrastes ortogonais foram testados para efeitos linear e quadrático, bem como os efeitos de 0% de GB na dieta e em comparação com os outros tratamentos e 2,5% vs 5 e 7,5% de GB, sendo estes significativos quando o P-value for ≤0,05 e considerado tendência quando P≤0,10. As dietas com GB não interferiram no consumo de MS e PB, entretanto, observou-se um efeito linear crescente no consumo de EE. Não houve interação do tempo em relação aos tratamentos sobre o pH, porém observou-se uma tendência linear crescente do pH após a inclusão da GB e valores mínimos deste parâmetro entre 2 e 4 horas pós-prandial (5,83 e 5,87, respectivamente). A fermentação ruminal foi alterada apresentando efeito quadrático na concentração de nitrogênio amoniacal, com valor mínimo de 8mg/dL ao nível de 4,11% de inclusão da GB (P<0,05). Constatou-se um efeito linear decrescente sobre a suplementação em relação ao desaparecimento da fração potencialmente solúvel (B) (P<0,05) e tendência linear decrescente da degradabilidade potencial (DP) da MS (P≤0,10). A degradabilidade efetiva (DE) da MS a taxa de passagem de 8%.h-1 aumentou linearmente (P<0,05), enquanto observou-se uma tendência linear decrescente (P≤0,10) da DE a uma taxa de passagem de 5%.h-1 e da fração indegradável (ID). Em relação a cinética da degradabilidade da proteína bruta (PB), foi verificado efeito linear crescente (P<0,05) da taxa degradação “c” da fração potencialmente solúvel e da DE em todos os tempos de passagem, enquanto e do tempo de colonização (TC) dos microrganismos diminuiu linearmente. Os resultados deste trabalho indicam que a suplementação em até 7,5% de GB em ovinos Santa Inês não causa efeitos negativos sobre o consumo e os parâmetros de fermentação ruminal, melhorando a degradação efetiva dos nutrientes.