A planta Ocimum gratissimum L., popularmente conhecida como alfavaca, é uma planta aromática, amplamente utilizada popularmente. Suas atribuições populares vão desde condimentar até antibacteriano e antifúngico. Objetivou-se com este trabalho avaliar o rendimento, composição e atividade antimicrobiana do óleo essencial (OE) de alfavaca. Para tanto, foi realizado o plantio do vegetal em canteiro. Assim que o mesmo atingiu a etapa de floração em seu ciclo vegetativo, foram realizadas as análises da planta. Uma amostra do solo do cultivo também foi coletada para análise química. Obteve-se o OE das folhas frescas, por hidrodestilação em aparelho de Clevenger e após, calculou-se o rendimento do OE. A caracterização química do mesmo foi realizada por cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrometria de massa (CG/EM) e sua atividade antimicrobiana, testada pelo método de microdiluição em caldo, frente diferentes espécies de fungos fitopatógenos. O solo utilizado foi classificado como nitrossolo vermelho distrófico, o qual apresentou valor elevado de matéria orgânica. O OE obtido apresentou rendimento de 0,18%. A análise de CG/EM detectou a presença de 30 compostos químicos, sendo o composto majoritário encontrado, o linalool (32,95%), seguido pelo 1,8 – cineol (21,91%), ambos, monoterpenos oxigenados. Os testes de atividade antimicrobiana demonstraram que o OE de alfavaca possui alta efetividade frente as espécies dos fungos fitopatógenos testados (Fusarium oxysporum f. sp. tracheiphilum (CMM-0033), Fusarium oxysporum f. sp. cubense (CMM-0813), Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (CMM-1104) Macrophomina phaseolina (CMM-2715), Fusarium oxysporum f. sp. cubense (CMM-2819), Rhizoctonia solani (CMM-3274),Fusarium solani (CMM-3828), Macrophomina phaseolina (CMM-3875), Macrophomina phaseolina (CMM-3615), Macrophomina phaseolina (CMM-3650)), sendo que as concentrações mínimas inibitórias variaram de 125 a 31,25 g mL-1. Considerou-se o OE de alta efetividade antimicrobiana, sendo potencial alternativa para o tratamento de doenças fitopatógenas causadas por organismos resistentes aos tratamentos convencionais.