O objetivo geral da presente pesquisa foi avaliar o efeito do LED 850 nm sobre diferentes processos metabólicos de células-tronco da polpa dentária in vitro. Para todos os estudos, células originárias da polpa de dentes decíduos humanos hígidos foram caracterizadas por imunofluorescência utilizando os anticorpos STRO-1, CD44, CD146, Nanog e OCT3/4, antes da realização dos protocolos experimentais. No estudo 1, células foram cultivadas em placas de acrílico, estimuladas à diferenciação odontoblástica e irradiadas com LED (850 nm) em diferentes doses de energia (DE - 0, 2, 4, 8, 15 ou 30 J/cm2, 40 mW/cm2), n=9. Após 12 h e 72 h da irradiação, foram avaliados o metabolismo celular (MTT), a formação de nódulos mineralizados (NM – Alizarin Red) e o número de células viáveis (Trypan Blue). Os dados foram submetidos aos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (p<0,05). Para o estudo 2, o mesmo protocolo experimental foi realizado, porém utilizando apenas as doses de 2 e 4 J/cm2 e o tempo de avaliação de 72 h pós-irradiação. Foram avaliados a atividade de fosfatase alcalina (ALP), a produção de proteína total (PT), produção de colágeno total (Sircol), bem como a expressão gênica (qPCR) de ALP, colágeno tipo I (Col I), sialoproteína da dentina (DSPP) e proteína da matriz dentinária (DMP-1), n=8. Os mesmos testes estatísticos foram utilizados. Para o estudo 3, as células foram semeadas sobre a
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Ana Paula S Turrioni - Doutorado
superfície pulpar de discos de dentina com 0,2 mm de espessura (n=72), submetidas ao mesmo protocolo de irradiação do estudo 2, aplicada sobre a superfície oclusal dos discos de dentina (n=8, ação transdentinária). Os testes incluíram viabilidade celular (MTT), atividade de ALP, produção de PT, expressão gênica de ALP, Col I, DSPP e DMP-1 e morfologia celular (MEV) e os dados foram submetidos aos mesmos testes estatísticos. Para o estudo 1, quando comparadas ao grupo controle, as células irradiadas com 2 ou 4 J/cm2 exibiram maior viabilidade celular após 72 h e todas as DEs aumentaram o número de células viáveis após 12 h. Para a formação de NM, os melhores resultados foram encontrados 72 h após a irradiação, para as doses de 8 e 15 J/cm2. Para o estudo 2, um aumento na atividade de ALP e síntese de colágeno, bem como aumento na expressão de DSPP e ALP foi observado para as duas DEs quando comparadas ao controle, sendo que 4 J/cm2 também estimulou a expressão gênica de Col I e DMP-1. No estudo 3, ambas as doses de energia aumentaram a viabilidade celular e a atividade de ALP. Para produção de PT, expressão de ALP e Col I, apenas 4 J/cm2 apresentou maiores valores quando comparados ao grupo controle. De um modo geral, foi possível bioestimular células pulpares com 4 J/cm2 de energia entregues pela luz LED no comprimento de onda 850 nm, tanto na ausência quanto na presença da barreira dentinária.