A ação antrópica sobre os ambientes naturais tem causado diversos problemas
ao meio ambiente. Dentre os ecossistemas mais impactados temos o aquático,
que é de suma importância para a sobrevivência de diferentes espécies. Diante
desse quadro em que nosso planeta se encontra diversas técnicas foram
desenvolvidas com o objetivo de mensurar os danos causados por poluentes
de origem química e física nos sistemas biológicos. Dentre as técnicas,
podemos citar o teste do micronúcleo, ensaio do cometa e o teste do letal
dominante. Com tudo tem-se a necessidade de desenvolver metodologias para
obtenção de resultados mais rápidos e precisos. A P450 é proteína que atua
no processo de desintoxicação celular e a mensuração de sua expressão tem
se mostrado uma técnica eficaz na predição de danos causado por poluentes
nos organismos. O presente trabalho teve como objetivo geral avaliar os efeitos
da radiação ionizante de 60Co sobre o sistema reprodutor dos moluscos
Biomphalaria glabrata, avaliando alterações na proteína P450, por meio da
analise da sua expressão gênica. Os objetivos específicos avaliou os efeitos
oxidativos da radiação ionizante sobre as gônadas de B. glabrata por meio do
ensaio do TBARS e realizou um estudo comparativo do perfil proteico
eletroforético das gônadas destes moluscos irradiados e não irradiados. Na
metodologia, foram selecionados 40 moluscos, adultos jovens, de Biomphalaria
glabrata, separados em 5 grupos e submetidos a radiação gama de 60Co
(Gammacell 220), nas doses de radiação de 10, 15, 20, 25 Gy e 0 (grupo não
irradiado). Para analise do perfil proteico das proteínas do sistema reprodutor
os moluscos irradiados e não irradiados foram dissecados e tiveram suas
gônadas retiradas. A concentração de acrilamida utilizada no gel de
eletroforese foi de 7,5%, segundo a metodologia de LAEMMLI (1970). Após a
corrida eletroforética, as proteínas foram fixadas e coradas com azul Comassie.
Para analise da peroxidação lipídica foi utilizada a quantificação do TBARS. A
determinação de TBARS foi realizada segundo metodologia proposta por
Ohkawa(1979). Para analisar expressão gênica foi preciso fazer extração do
RNA total com a finalidade de obtenção da porção de RNAm da gônada do
Biomphalaria glabrata. A extração do RNA total foi com o reagente comercial a
base de etanol e tiocianato de guanidina (TRIZOL – Invitrogen). Para montar a
biblioteca de cDNA foi utilizado o kit GoScript™ Reverse Transcriptase. As
reações de PCR em tempo real foram realizados em triplicata com um volume
final de 12μL utilizando o Sybr Green PCR Master mix, o gene referencia
utilizado foi o de actina A PCR em tempo real foi realizada no aparelho 7500
Real Time PCR system (Applied Biosystems®). As comparações estatísticas
entre os grupos e as concentrações de TBARS, por dose de radiação, foram
realizadas por meio do o teste de variância ANOVA e o teste post-hoc de
Tukey com nível de significância de 5% e p<0,05. Para validar a
homogeneidade da reação de expressão gênica foi utilizado o teste “t” de
Student (p < 0,05) (Prism - graphpad). Com os resultados observamos no perfil
eletroforético uma diferença entre os perfis proteico das gônadas de B. glabrata
dos moluscos irradiados e não irradiados. Obervou-se também que tanto nos
grupos irradiados como no grupo não irradiados o aparecimento de sete
bandas de interesse na faixa de 47,12 e 55,96 kDa. No teste de peroxidação lipidica com 24 horas após a irradiação foi percibo um aumento na reação com
TBARS, demostrando um aumento na peroxidação lipidica. Na análise da
expressão gênica da P450 obtivemos um aumento na expressão nas doses de
10, 15 e 20 Gy, já na dose de 25Gy houve uma repressão do gene
demonstrando os danos da radiação sobre o organismo do animal. Podemos
concluir que as gônadas dos moluscos B. glabrata se mostraram um ótimo
tecido de analise de danos causados pela radiação ionizante e os testes
utilizados demonstraram ser viaveis para serem utilizados como testes de
biomonitoramento ambiental para areas impactadas por agentes fisicos.