O crescente interesse das pessoas por produtos saudáveis, vem estimulando pesquisas e desenvolvimento de métodos para análise de alimentos e bebidas em ascendência, como a kombucha. Este produto é uma bebida fermentada com característica frisante, sabor pouco adocicado e levemente ácido composta por substâncias associadas a alguns benefícios a saúde, como compostos com atividades antioxidantes, componentes bioativos e substâncias que inibem o crescimento de células cancerosas, dentre outros. Recentemente, foi regulamentado, no Brasil, o padrão de identidade e qualidade (PIQ) da kombucha, definindo a graduação de etanol menor que 0,5%, v/v para a kombucha ser considerada uma bebida não alcoólica, pois impacta na tributação da bebida. Esta dissertação se propôs ao desenvolvimento de um método amostragem por headspce e cromatografia gasosa combinada a detecção por espectrometria de massas (HS-CG-EM) para determinação de etanol em kombuchas. Com o método desenvolvido e alguns parâmetros de validação de métodos analíticos avaliados garantiu-se a qualidade e a confiabilidade dos resultados, e no caso da kombucha, há também fatores de segurança alimentar, pois significa que as análises de rotina usadas para determinar a graduação de etanol desta bebida resultam em valores consistentes com as características reais da matriz e do analito de interesse. Foram testados padrões de etanol (0,1; 0,3; 0,5; 0,6; 0,7; 1,0% (v/v)) para construção da curva analítica e amostras de kombuchas comerciais, abrangendo 4 sabores: (beterraba com gengibre e uva; hibisco com água de rosas e maça; limão com gengibre e maracujá com capim santo), em dois tempos da produção da bebida, antes e depois do envase final, para determinar a quantidade de etanol presente. Foi usado a técnica de headspace antes da injeção em uma coluna VF-WAXms para concentração do analitos na fração volatilizada dos frascos, injeção do tipo split 100:1 para preservação da coluna. A corrida cromatográfica teve um tempo total de 6min por amostra e foi realizada iniciando a 40ºC, seguido de uma rampa de temperatura de 50ºC/min até 140ºC mantidos por 1min. A detecção ocorreu no espectrômetro de massas operando no modo scan de massa entre 10 e 30. Após análises cromatográficas, foi possível verificar limite de detecção de 0,001% (v/v), limite de quantificação foi 0,003% (v/v), coeficiente de correlação linear de 0,99, coeficiente de determinação foi 0,98 e regressão linear definida pela equação da reta y=0,4165+4,3334x. O método foi elaborado a partir de adaptações da literatura e verificado os ensaios considerando as orientações do documento de validação de método analítico do Instituto Nacional de Metrologia, Qualidade e Tecnologia (INMETRO), DOQ-CGRE-008. O programa estatístico R 4.2.1 foi usado em todas as etapas matemáticas de tratamento dos resultados dos ensaios desta validação de método analítico. O uso da técnica de HS-CG-EM demonstrou ser linear, sensível e precisa para determinação do teor de etanol de kombuchas sem necessidade de preparo de amostras, e utilizando um sistema de instrumentos analíticos disponível em muitos laboratórios analíticos. Então, este método estudado deve contribuir para comunidade geral dada a importância das regulamentações recentes relacionadas a kombucha e as necessidade comerciais desta bebida.